STEMCELL Technologies STEMdiff STEMdiff Choroid Plexus Organoid Differentiation Kit
- 研究用
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STEMdiff™ Choroid Plexus Organoid Differentiation Kit（ST-100-0824）は、血液脳脊髄液バリアを形成する特殊な脳上皮「脈絡叢」にパターン化された、ヒト多能性幹細胞（hPSC）由来のオルガノイドを作製する無血清培地のキットです。
脈絡叢オルガノイドを使用すると、ヒト神経バイオマーカーの発見や中枢神経系（CNS）の透過性に対し、in vitroでアプローチ可能になります。3次元の組織構造と機能的なバリア上皮を備えたオルガノイドにより、薬剤分布や脳脊髄液（CSF）の産生・抽出に関わるCNS透過性を、前例ない到達度と制御下で研究できます。
本品の簡易な5段階のプロトコルでは、下流のさまざまな用途向けの脈絡叢オルガノイドを再現性よく効率的に作製できます。
本品は、実験動物の削減、代替、改良における画期的な成果として3R賞を受賞した、Pellegrini et al.（Science, 2020）の組成に基づいています。
脈絡叢オルガノイドの形成は、中間的な胚様体（EB）形成のステップから開始され、神経上皮の増殖、脈絡叢様上皮へのパターン化が続きます。成熟期間の後、オルガノイドはCSFに類似した液体で満たされ、上衣脈絡叢特異的マーカー（TTR、CLIC6、AQP1）を発現する上皮層に囲まれた嚢胞構造を示します。
オルガノイドを長期間（> 40日）培養して成熟させる場合、必要なキット構成品を STEMdiff™ Choroid Plexus Organoid Maturation Kit（ST-100-0825）として購入できます。
2018/05/14 12:00の製品情報
本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。
製品の特長
STEMdiff™ Choroid Plexus Differentiation Kitで、ヒトES/iPS細胞を脈絡叢オルガノイドに分化
- ヒトCNS障壁モデルとしてin vitroで正確に制御でき、薬剤スクリーニングにも適合
- 複雑な共培養またはTranswell®システムの使用を回避
- 腰椎穿刺に代わり完全な血液フリー条件でCSFを抽出し、CNS特異的バイオマーカーを特定
- CSFをマウス1匹からの50倍取得し、プールされた臨床サンプルのドナー間変動を回避
Figure 1. Protocol Schematic for the STEMdiff™ Choroid Plexus Organoid Differentiation and Maturation Kits
Choroid plexus organoids can be generated from human embryonic stem (ES) or induced pluripotent stem (iPS) cells in 30 days. The protocol begins with embryoid body (EB) formation, followed by expansion of neuroepithelia and patterning to choroid plexus-like epithelium. After a period of epithelial maturation including extensive bubbling, the organoids develop cystic structures surrounded by an ependymal epithelial layer and filled with a fluid resembling cerebrospinal fluid (CSF).
データ紹介
Figure 2. Organoids Generated Using the STEMdiff™ Choroid Plexus Organoid Differentiation and Maturation Kits Exhibit Fluid-Filled Cysts and Ependymal Epithelial Morphology
(A) Phase-contrast image of a whole choroid plexus organoid at day 40 using the STEMdiff™ Choroid Plexus Organoid Differentiation and Maturation Kits. Organoids exhibit translucent cysts containing a CSF-like fluid. (B) Epithelia on choroid plexus organoids exhibit a tightly packed and cuboidal morphology typical of ependymal cells that line the brain ventricles in vivo.
Figure 3. Choroid Plexus Organoids Express Markers of Ependymal Epithelium and Show Limited Expression of Neuroepithelial Markers
Immunohistological analysis on whole cleared and stained (Masselink et al. 2019) choroid plexus organoids at day 40 reveals that their cystic structures are (A) TTR- (green) and (B) CLIC6- (red) positive. (C) These ependymal cell markers are highly co-localized. (D) Bundles of MAP2-positive (magenta) neurons are observed but are not co-localized with the ependymal cell markers.
Figure 4. Fluid Extracted from Cysts in Choroid Plexus Organoids is Enriched with Clusterin Protein, A Marker of Cerebrospinal Fluid (CSF)
CSF-like fluid was extracted from cysts contained in day 40 choroid plexus organoids using a 28G syringe. A western blot was performed on the extracted fluid to detect Clusterin and shows a band between the 37 and 50 kDa molecular weight marker. Clusterin is a soluble secreted chaperone protein found in high abundance in CSF.
本品が基づく組成を開発したPellegrini博士のウェビナー：
Modeling Brain Barrier Permeability and CSF Secretion with Choroid Plexus Organoids
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