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2019/04/04

「mTeSR Plus」新発売:週2回の培地交換で高品質なES/iPS細胞を!

  • 用途別細胞培養

「mTeSR Plus」は、週2回の培地交換でも高品質な細胞を維持可能。緩衝作用(pH)の改善とFGF2の安定化を実現したヒトES/iPS細胞維持培地です。
ここでは、「mTeSR Plus」で維持したES/iPS細胞品質を紹介いたします。

フレキシブルな培地交換スケジュール

mTeSR Plusは週2回の培地交換でも細胞品質を維持できます。(パフォーマンステスト済み)

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Fig.1 週2回の培地交換スケジュール例

mTeSR Plus培地交換のルールに従って、自分のフレキシブルな培養スケジュールで実施してください。

培地交換ルールの詳細(mTeSR Plus 製品情報)

高品質な細胞① 緩衝作用の改善とFGF2の安定化

最近の研究により、培地のアシドーシスがDNA損傷のレベル、ゲノムの不安定性、およびヒトES/iPS細胞の増殖抑制と関連していることがわかってきています。
mTeSR Plusの安定化強化により培地のpHが維持され、アシドーシスによる細胞への各種ダメージを軽減します。
mTeSR Plusはゴールドスタンダード「mTeSR 1」の組成にもとづいた無血清培地ですが、4日間完全フリーで培養可能、緩衝作用(pH)の改善とFGF2※を含む培地の主要成分が安定化されており、細胞の品質をサポートします。

※FGF2(Fibroblast Growth Factor, 線維芽細胞成長因子):無血清の条件下で未分化なヒトES細胞を維持させる不可欠な成長因子として、2000年にMichal Amitらによって発見されました

※mTeSR1:世界50か国以上、1,500報以上の論文で使用実績がある世界No.1 のES/iPS細胞維持培地です

高品質な細胞② 優れた形態と増殖能

mTeSR Plusで培養したES/iPS細胞は、明確な辺縁を有する均一で密集したコロニー(高い細胞品質の証明)を形成します。
細胞は10継代後も幹細胞の特徴である顕著な核小体および高い核対細胞質比(N/C)を保持しています。mTeSR Plusは、mTeSR1より1.5倍以上の増殖能を有しています。

高品質な細胞③ 幹細胞の未分化性を維持

10 ~ 15継代培養したヒトES細胞株(H1, H9)とヒトiPS細胞株(WLS-1C, STiPS-M001)は、未分化マーカーの発現を維持します。

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Fig. 2 mTeSR Plus(週2回の培地交換)で維持培養した細胞の未分化マーカーの発現が維持されている確認
フローサイトメトリーによりヒトES細胞株(H1, H9)とヒトiPS細胞株(WLS-1C, STiPS-M001)の未分化マーカー((A) OCT3/4 と (B) TRA-1-60)発現データ

高品質な細胞④ 3胚葉への多分化能を維持

mTeSR Plusで培養したiPS細胞(WLS-1C)は、3胚葉へ効率的な分化を示しています。

3胚葉へ多分化能評価について

STEMCELL Technologies社のSTEMdiff Trillineageは、研究室で維持している細胞株や、新たに樹立した細胞株の品質管理を簡便に行えます。従来のテラトーマアッセイやEB法に代わる、低コストで信頼性の高いアッセイとしてご利用ください。あるいは、本製品をスクリーニングとして使用し、従来法で詳細な確認を行うことも可能です。

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Fig. 3 mTeSR Plus(週2回の培地交換)で維持培養したiPS細胞 (WLS-1C) は、3胚葉へ効率的な分化を示す
mTeSR1(毎日培地交換)とmTeSR Plus(週2回培地交換)で10継代以上培養した

高品質な細胞⑤ ES/iPS細胞に関連する遺伝子発現プロファイルを維持

mTeSR1(毎日培地交換)とmTeSR Plus(週2回の培地交換)で10 継代以上培養したヒトES細胞株(H9)とヒトiPS細胞株(STiPS-M001)は、同等の遺伝子発現プロファイルを維持します。

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Fig. 4. mTeSR Plus(週2回培地交換)で維持培養したES/iPS細胞の遺伝子発現プロファイルはmTeSR1(毎日培地交換)で維持培養したES/iPS細胞と同じ発現パターンを示す。
RNAseqによるmTeSR Plus(週2回培地交換)及びmTeSR1(毎日培地交換)で 10 継代以上維持されたヒトES細胞株(H9)とヒトiPS細胞株(STiPS-M001)のトランスクリプトーム解析による遺伝子発現プロファイル(ES/iPS細胞に関連する19,665個遺伝子解析結果)。

高品質な細胞⑥ 正常な核型を維持

ヒトES/iPS細胞は、ルーチンな培養中にノンランダムかつ散発的に核型異常を獲得する能力があります。これらの細胞遺伝学的変化の背後にあるメカニズムは未知です。再発性の異常がヒトの癌においても多くに観察されており、治療用途にこれらの細胞を使用することに対して安全性の懸念が議論されています。

mTeSR Plusはその培地の安定性により、遺伝子の安定性ももたらします。

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Fig. 5 mTeSR Plusの培地交換週2回のプロトコールで培養した(左) ヒトES (H1)、(右) iPS (WLS-1C) 細胞。12継代しても遺伝子異常は検出されず。(A)hPSC Genetic Analysis Kit(B)Gバンド法

ヒトES/iPS細胞において最も影響を受け易い染色体は、1、8、10、12、17、18、20、およびXと言われています。
しかし、20qの変異は小さいため、Gバンド法で確認しにくい異常と言われています。Gバンドで確認できない異常なら、Genetic Analysis Kit※をお試し下さい。
※ヒト多能性幹細胞(ES/iPS細胞)で報告されている8種類の核型異常を同時検出できるスクリーニング用qPCRキットです。

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Fig.6 hPSC Genetic Analysis KitによりGバンド法で重複の検出確認が出来なかった20q11.21染色体重複を同定

(A)hPSC Genetic Analysis KitでSTiPS-4D1 hiPS 細胞株の20q11.21染色体重複を検出 (B)バンド法では染色体重複を検出できず (C) 20p11(緑)と20q11.21(赤)のプローブによる蛍光in situハイブリダイゼーションで確認。

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