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STEMCELL Technologies STEMdiff STEMdiff Forebrain Neuron Maturation Kit

  • 研究用

STEMdiff Forebrain Neuron Maturation Kit(ST-08605)は、STEMdiff Forebrain Neuron Differentiation Kit(ST-08600)との併用により、ヒト多能性幹細胞(hPSC)由来の神経前駆細胞から、前脳型(FOXG1陽性)ニューロンの混合集団を作製できます。

得られるニューロンは純度が高く (≥ 90% class III β-tubulin-positive neurons; < 10% GFAP-positive astrocytes)、機能性で、長期培養により維持できます。これらの神経細胞は、ヒト神経の発達・疾患モデル、薬物スクリーニング、毒性評価、細胞療法の検証といった多用途向けの研究ツールとなります。

2018/05/14 12:00の製品情報

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本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。

製品の特長

STEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Kitで、hPSC由来ニューロン前駆体から機能性ニューロンに成熟

  • 明確な組成の無血清培地
  • hPSC由来ニューロン前駆体から機能性ニューロンを効率的に作製
  • 高純度(≥ 90% neurons)の興奮性・抑制性神経細胞の混合集団を作製し、長期に培養維持可能
  • STEMdiff™ Forebrain Neuron Differentiation Kitで作製したニューロン前駆体の成熟に最適
  • 神経活動をサポートし、生理学的に適切な結果を取得
  • 複数のヒトES/iPS細胞株由来のニューロン前駆体から、再現性良くニューロンに成熟

前脳型ニューロン分化・成熟の流れ

胚様体(EB)培養プロトコル

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単層培養プロトコル

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詳細な手順は、製品添付文書をご確認ください。

データ紹介

STEMdiff™ Forebrain Neuron Kitsで作製した前脳型ニューロン

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mTeSR™ 1で継代培養したヒト人工多能性幹(iPS)細胞から、STEMdiff™ SMADi Neural Induction Kitにより胚様体(EB)プロトコルで神経前駆細胞を作製し、さらにSTEMdiff™ Forebrain Neuron Differentiation Kit と Maturation Kitで前脳型ニューロンに分化、成熟させた。
(A)iPS細胞由来の神経前駆細胞をSTEMdiff™ Forebrain Neuron Differentiation Kitで7日間、STEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Kitで14日間培養した後、前脳型ニューロンが形成された。得られた培養物には、(B)クラスIIIβ-チューブリン陽性ニューロン(緑)の非常に純粋な集団が含まれる一方、(C)アストロサイト(GFAP陽性細胞、赤)は10%未満であった。(D)核はDAPI(青)で標識した。

NPCからニューロンへの下流分化が可能

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(A) mTeSR™1で培養されたヒト多能性幹細胞(hPSC)STiPS-R038株から、STEMdiff™ SMADi Neural Induction Kitを用いてEBプロトコルで作製したNPCを、STEMdiff™ Forebrain Neuron Differentiation Kitを用いて7日間、さらにSTEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Kitを用いて14日間培養し、皮質ニューロンへと分化・成熟させた。得られた培養物には、(B) クラスIII β-チューブリン陽性ニューロン(緑)の高純度集団が含まれ、GFAP陽性アストロサイトは10%未満(図示せず)であった。(C) これらのニューロンはFOXG1発現(赤)も陽性で、前脳型を示した。(D) 核はHoechst(青)で染色した。

前脳型皮質ニューロン混合集団を作製

08605-Fig-5.png

iPS細胞由来NPC(AIW002-02株)から作製された前脳型ニューロンを、STEMdiff™ Forebrain Neuron Differentiation Kitを用いて7日間培養した後、STEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Kitを用いて6週間成熟させた。得られた培養物には、興奮性ニューロンのグルタミン酸作動性マーカー VGLUT1を発現するニューロン(緑)と、成熟ニューロンを示すMAP2陽性ニューロン(マゼンタ)が混在している。核はHoechst(青)で標識した。データ提供:マギル大学 神経早期創薬ユニット(EDDU)のCecilia Rocha氏。

hPSC由来アストロサイトとの共培養による細胞間相互作用モデル

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H1細胞株由来のNPCを、STEMdiff™ Astrocyte DifferentiationおよびMaturation Kitを用いてアストロサイトへと分化させた。H9細胞株由来のNPCを、STEMdiff™ Forebrain Neuron DifferentiationおよびMaturation Kitを用いて前脳型ニューロンへと分化させた。共培養では、成熟アストロサイトを、STEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Mediumで1週間以上培養した前脳ニューロン上に播種した。その翌日、培地をSTEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Mediumに切り替え、以降の培養に用いた。(A) 共培養と同じ給餌スケジュールで単独培養したニューロンをDCX(緑)で標識した。(B) DCX陽性ニューロン(緑)とアストロサイト(GFAP、赤)は、解析前に少なくとも1~2週間は共培養できる。

hPSC由来アストロサイトと共培養したニューロンの生存および成熟

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STiPS-R038細胞株由来のNPCを、STEMdiff™ Astrocyte DifferentiationおよびMaturation Kitを用いてアストロサイトへと分化させた。STiPS-M001細胞由来のNPCを、STEMdiff™ Forebrain Neuron DifferentiationおよびMaturation Kitを用いて前脳型ニューロンへと分化させた。1週間の共培養後、ニューロンは(A)ImageJ用NeuriteTracerプラグイン(M Pool et al. J Neurosci Methods, 2008)によりMAP2陽性ニューロンを測定した結果、神経突起伸長が有意に増加しており、(B)同じ給餌スケジュール下で単独培養したニューロンよりも数が多かった。*, p < 0.05;**, p < 0.01。

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