STEMCELL Technologies STEMdiff STEMdiff Astrocyte Differentiation Kit
本品は、STEMdiff™ Astrocyte Differentiation Kit（ST-08540）の後継品です。
- 研究用
STEMdiff™ Astrocyte Differentiation Kit（製品コード：ST-100-0013）は、STEMdiff™ SMADi Neural Induction Kit（ST-08581）を用いて作製したヒト多能性幹細胞（hPSC）由来の神経前駆細胞（NPC）から、アストロサイト（星状細胞）前駆体を迅速かつ効率的に作製する無血清培地です。
本品で作製したアストロサイト前駆体は、STEMdiff™ Astrocyte Serum-Free Maturation Kit（ST-100-1666）によってアストロサイトへと成熟させられます。
これらの無血清培養系によって、hPSCから高純度のアストロサイト集団（平均で、S100B陽性率70%超およびGFAP陽性率60%超のアストロサイト; ダブルコルチン/DCX陽性ニューロン15%未満）をわずか7週間で作製し、長期に培養維持できます。得られるアストロサイトは、ヒトの神経学的発生と疾患のモデリング、薬物スクリーニング、毒性試験、細胞療法の検証などに使用できる多用途なツールとなります。
2018/05/14 12:00の製品情報
本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。
製品の特長
STEMdiff™ Astrocyte Differentiation Kitで、hPSC由来NPCからアストロサイト前駆体を作製
- 組成が明確な、無血清培地
- 機能性アストロサイトを高い効率で作製
- STEMdiff™ SMADi Neural Induction Kitで誘導したNPCからの分化に最適
- 複数のhPSC株から再現性高く、皮質型アストロサイト前駆体を作製
アストロサイト分化の流れ
本品はアストロサイト前駆体への分化用培地です。アストロサイト前駆体からアストロサイトへの成熟には、STEMdiff™ Astrocyte Serum-Free Maturation Kit（ST-100-1666）が必要になります。
胚様体/Embryoid Body（EB）培養プロトコル
再播種したEBから神経ロゼットを選択後、20日程度でhPSC由来NPCから皮質型アストロサイト前駆体を作製できます。
単層培養プロトコル
3回のシングルセル継代を経たhPSC由来NPCの単層培養から、21日程度で皮質型アストロサイト前駆体を作製できます。
データ紹介
皮質型アストロサイトの作製
TeSR™-E8™で維持されたhPSCからSTEMdiff™ SMADi Neural Induction Kit のEB法をもちいて作製したNPCを、STEMdiff™ Astrocyte Differentiation / Maturation Kitsで分化、成熟させ（各キットで3週間ずつ培養）、皮質型アストロサイトを得た。
（A）細胞核の染色（DAPI、灰色）。得られた培養物には高純度のアストロサイト集団が含まれ、（B）60％超がGFAP陽性（緑）、（C）70％超がS100B陽性（マゼンタ）である一方、（D）ニューロン（DCX陽性細胞、シアン）は15％未満だった。スケールバー = 100 μm。
アストロサイトに特徴的な遺伝子発現
様々なhPSC株（n = 6、mTeSR™1 または TeSR™-E8™ で維持）を、STEMdiff™ SMADi Neural Induction Kitを用いてEBプロトコルでNPCへと分化させた。NPCをSTEMdiff™ Astrocyte Differentiation Kit およびMaturation Kitで3週間ずつ培養し、解析した。発現レベルを定量PCR（qPCR）により測定し、ハウスキーピング遺伝子である18SおよびTBPを基準として、hPSC対照群に対し正規化した。
hPSC由来ニューロンとの共培養による細胞間相互作用モデル
H1細胞株由来のNPCを、STEMdiff™ Astrocyte DifferentiationおよびMaturation Kitを用いてアストロサイトへと分化させた。H9細胞株由来のNPCを、STEMdiff™ Forebrain Neuron DifferentiationおよびMaturation Kitを用いて前脳型ニューロンへと分化させた。共培養では、成熟アストロサイトを、STEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Mediumで1週間以上培養した前脳ニューロン上に播種した。その翌日、培地をSTEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Mediumに切り替え、以降の培養に用いた。(A) 共培養と同じ給餌スケジュールで単独培養したニューロンをDCX（緑）で標識した。(B) DCX陽性ニューロン（緑）とアストロサイト（GFAP、赤）は、解析前に少なくとも1～2週間は共培養できる。
hPSC由来アストロサイトと共培養したニューロンの生存および成熟
STiPS-R038細胞株由来のNPCを、STEMdiff™ Astrocyte DifferentiationおよびMaturation Kitを用いてアストロサイトへと分化させた。STiPS-M001細胞由来のNPCを、STEMdiff™ Forebrain Neuron DifferentiationおよびMaturation Kitを用いて前脳型ニューロンへと分化させた。1週間の共培養後、ニューロンは（A）ImageJ用NeuriteTracerプラグイン（M Pool et al. J Neurosci Methods, 2008）によりMAP2陽性ニューロンを測定した結果、神経突起伸長が有意に増加しており、（B）同じ給餌スケジュール下で単独培養したニューロンよりも数が多かった。*, p < 0.05；**, p < 0.01。
