STEMCELL Technologies STEMdiff STEMdiff Astrocyte Differentiation Kit
- 研究用
STEMdiff™ Astrocyte Differentiation Kit(ST-100-0013)は、STEMdiff™ SMADi Neural Induction Kit(ST-08581)を用いて作製したヒト多能性幹細胞(hPSC)由来の神経前駆細胞(NPC)から、アストロサイト(星状細胞)前駆体を迅速かつ効率的に生成するために使用します。
本品で生成したアストロサイト前駆体は、STEMdiff™ Astrocyte Maturation Kit(ST-100-0016)によってアストロサイトへと成熟させることができます。この培養系を用いることで、hPSCから高純度のアストロサイト集団(> 70% S100B-positive and > 60% GFAP-positive astrocytes; < 15% doublecortin-positive neurons)を7週間で生成し、長期培養で維持することができます。これらの細胞は、ヒトの神経学的発生と疾患のモデリング、薬物スクリーニング、毒性試験ならびに細胞療法の検証のための多用途のツールとなります。
本品は、STEMdiff™ Astrocyte Differentiation Kit(ST-08540)の後継品です。
製品の特長
STEMdiff™ Astrocyte Differentiation Kitをもちいて、hPSC由来NPCからアストロサイト前駆体を生成できます
- 組成が明確な、無血清培地です
- 機能性アストロサイトの高効率な生成をサポートします
- STEMdiff™ SMADi Neural Induction Kitをもちいて生成したNPCからの分化に最適化されています
- 複数のヒトES細胞およびiPS細胞株から再現性高く、皮質型アストロサイト前駆体を生成することができます
アストロサイト分化の流れ
本品はアストロサイト前駆体への分化用培地です。アストロサイト前駆体からアストロサイトへの成熟には、STEMdiff™ Astrocyte Maturation Kit(ST-100-0016)が必要になります。
胚様体/Embryo Body(EB)形成からのワークフロー
再播種したEBから神経ロゼットを選択後、20日程度でhPSC由来NPCから皮質型アストロサイト前駆体を作製できます。
単層培養からのワークフロー
3回のシングルセル継代を経たhPSC由来NPCの単層から、21日程度で皮質型アストロサイト前駆体を作製できます。
データ紹介
皮質型アストロサイトの作製
TeSR™-E8™で維持されたhPSCからSTEMdiff SMADi Neural Induction Kit のEB法をもちいて作製したNPCを、STEMdiff Astrocyte Differentiation / Maturation Kitsをもちいて分化、成熟させました。各キットで3週間ずつ培養後に皮質型アストロサイトが形成されました。
(A)細胞核はDAPI(灰色)で染色されています。得られた培養物には高純度のアストロサイト集団が含まれ、(B)60%超がGFAP陽性(緑)、(C)70%超がS100B陽性(マゼンタ)である一方、(D)ニューロン(DCX陽性細胞、シアン)は15%未満でした。スケールバー = 100 μm。
アストロサイトに特徴的な遺伝子発現
Embryonic stem and induced pluripotent stem cells from a variety of lines (n = 6, maintained in mTeSR™1 or TeSR™-E8™) were differentiated to NPCs using the STEMdiff™ SMADi Neural Induction Kit embryoid body protocol. Cells were then grown in STEMdiff™ Astrocyte Differentiation Kit for 3 weeks followed by STEMdiff™ Astrocyte Maturation Kit for 3 weeks prior to analysis. Expression levels were measured by quantitative PCR (qPCR) and normalized to hPSC controls relative to housekeeping genes 18S and TBP.
hPSC由来ニューロンとの共培養による細胞間相互作用モデル
NPCs generated from the H1 cell line were differentiated to astrocytes using STEMdiff™ Astrocyte Differentiation and Maturation Kits. H9 cell-derived NPCs were differentiated to forebrain-type neurons using STEMdiff™ Forebrain Neuron Differentiation and Maturation Kits. For co-culture, matured astrocytes were seeded onto forebrain neurons that had been in STEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Medium for at least one week. Co-cultures were then switched to STEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Medium the following day and for the remaining co-culture. (A) Neurons cultured alone, following the co-culture feeding schedule, are labeled with DCX (green). (B) DCX-positive neurons (green) and astrocytes (GFAP, red) can be co-cultured for at least 1 - 2 weeks prior to analysis.
hPSC由来ニューロン共培養時の生存および成熟
NPCs generated from the STiPS-R038 cell line were differentiated to astrocytes using STEMdiff™ Astrocyte Differentiation and Maturation Kits. STiPS-M001 cell-derived NPCs were differentiated to forebrain-type neurons using STEMdiff™ Forebrain Neuron Differentiation and Maturation Kits. After co-culture for one week, neurons (A) had significantly increased neurite outgrowth as measured on MAP2-positive neurons with the NeuriteTracer plugin for ImageJ (M Pool et al. J Neurosci Methods, 2008) and (B) were more numerous than neurons cultured alone using the same feeding schedule. *, p < 0.05; **, p < 0.01.
共培養の手順はこちら:
ニューロン‐アストロサイト共培養プロトコル(STEMCELL Technologies社ウェブサイト)
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