STEMCELL Technologies STEMdiff STEMdiff Neural Crest Differentiation Kit
- 研究用
STEMdiff™ Neural Crest Differentiation Kit（ST-08610）は、ヒト胚性幹（ES）細胞および人工多能性幹（iPS）細胞を神経堤細胞（神経冠細胞、Neural crest cell；NCC）に分化させる無血清培地です。
SOX10やCD271などのマーカーで特徴づけられるこれらの神経堤細胞は、軟骨細胞、骨芽細胞、末梢ニューロンを含む下流の派生物に分化させることができます。
本品は、mTeSR™1（ST-85850）、mTeSR™ Plus（ST-100-0276）またはTeSR™-E8™（ST-05990）のいずれかで維持されたヒト多能性幹細胞（hPSC）からの分化に適しています。
2018/05/14 12:00の製品情報
本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。
製品の特長
STEMdiff Neural Crest Differentiation Kitで、ヒト多能性幹細胞（hPSC）から神経堤細胞を樹立できます
- 迅速 ― 簡便な単層プロトコルにより、わずか6日間で神経堤細胞（NCC）を作製します
- 効率的 ― 純度70％以上の多能性NCCを獲得します（※）
- 多能性 ― 末梢ニューロンなどに分化可能なNCCを産生します
- 汎用性 ― mTeSR™1、mTeSR™ Plus、またはTeSR™-E8™で維持されたヒト多能性幹細胞（hPSC）に適合します
※ SOX10+神経堤細胞が70％以上（同時にCD271+, TFAP2+, HNK1(CD57)+, FOXD3+）、かつPAX6+ 神経外胚葉性細胞が20％未満
分化誘導ワークフロー
ヒト多能性幹細胞（hPSC）をSTEMdiff™ Neural Crest Differentiation Kitで6日間培養して、神経堤細胞（NCC）を作製します。
続くNCCの継代方法については、お問い合わせください。
作製したNCCは、「STEMdiff™ Sensory Neuron」で感覚ニューロンへと分化・成熟できます：
痛みの研究に有用なヒト感覚ニューロンの作製
データ紹介
中枢神経系（CNS）タイプの前駆細胞を最小限に抑え、高純度の神経堤細胞集団を産生
STEMdiff™ Neural Crest Differentiation Kitで培養開始から6日後、神経堤細胞（SOX10+, 赤; CD271+, 水色）の数はCNS型前駆細胞（PAX6+, 緑）を上回りました。
（A）培養6日目に継代し、2日後に固定した細胞の免疫蛍光チャネル重ね合わせ画像。個々のチャネルは、（B）DAPI、（C）PAX6、（D）SOX10、（E）CD271です。
複数のESおよびiPS細胞株から、高純度（>70％ SOX10+）の神経堤細胞に分化
(A) STEMdiff™ Neural Crest Differentiation Kitで培養開始から6日目の、NCC形態を示す代表的な明視野および免疫細胞化学画像。NCC培養物はフェーズダーク形態を示し、神経堤マーカー SOX10およびCD271に陽性です。PAX6+ 神経外胚葉細胞はほとんど含まれません。
(B) SOX10+ およびPAX6+ 細胞の割合の定量化。mTeSR™1またはTeSR™-E8™で維持されたヒトESおよびiPS細胞株はSOX10+ NCCへ効率よく転換し（85.5±1.6％; 平均±SEM; n = 9）、PAX6+ 神経外胚葉細胞はごく低レベル（5.6±0.7％; 平均±SEM; n = 9）でした。数値は、タイル化画像のDAPI全体に対する陽性率です。ドットは、個々の実験結果を示します。
hPSC由来の神経堤細胞は、軟骨細胞、骨芽細胞、および末梢神経細胞へ分化可能
（A）細胞周囲の軟骨の沈着を示すアルシアンブルー/核ファストレッドで染色された軟骨細胞ペレット。hPSC 計4株がこの系統に正常に分化しました（STiPS-M001株を掲載：X10）。
（B）アルカリホスファターゼ陽性ミネラル沈着を示す骨芽細胞。hPSC 計4株がこの系統に正常に分化しました（STiPS-M001株を掲載：X4）。
（C）12日間分化した後の末梢ニューロンでは、細胞体および軸索に沿ってペリフェリン（緑色）が高発現しました（X10）。これらの細胞の一部は、核（青）でBRN3a（赤）も発現しました。hPSC 計6株がこの系統に正常に分化しました（STiPS-M001株を掲載）。
