STEMCELL Technologies STEMdiff STEMdiff Forebrain Neuron Differentiation Kit
- 研究用
STEMdiff™ Forebrain Neuron Differentiation Kitは、STEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Kit(製品コード:ST-08605)との併用により、ヒト多能性幹細胞(hPSC)由来の神経前駆細胞から、前脳型(FOXG1陽性)ニューロンの混合集団を作製できます。
本品は、STEMdiff™ SMADi Neural Induction Kit(ST-08581/08582)で誘導した神経前駆細胞(NPC)からの分化に最適化されています。
これらのSTEMdiff™培地で作製される前脳ニューロンは、ヒト神経の発達および疾患モデル、薬物スクリーニング、毒性評価、細胞療法の検証など多目的な研究ツールとして使用できます。
関連製品:
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iPSCコントロール株から分化誘導済みの前脳ニューロン前駆細胞の凍結品
製品の特長
*本品は、hPSC由来NPCから前脳ニューロン前駆体を作製するキットです。前脳ニューロン前駆体から前脳ニューロンに成熟させるには、STEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Kit(ST-08605)が必要になります。
STEMdiff™ Forebrain Neuron Differentiation Kitで、hPSC由来の前脳ニューロン前駆体を作製
- hPSC由来の機能性ニューロンを高い効率で作製
- 高純度(90%以上)の興奮性・抑制性混合ニューロン集団の産生と、長期の培養維持が可能
- STEMdiff™ SMADi Neural Induction Kitで作製したNPCからの分化に最適
- 神経活動をサポートし、生理学的関連性のある結果を取得
- 複数のhPSC株から再現性良く分化
前脳型ニューロン分化・成熟の流れ
胚様体(EB)培養プロトコル
単層培養プロトコル
詳細な手順は、製品添付文書をご確認ください。
データ紹介
STEMdiff™ Forebrain Neuron Kitsで作製した前脳型ニューロン
mTeSR™ 1で継代培養したヒト人工多能性幹(iPS)細胞から、STEMdiff™ SMADi Neural Induction Kitにより胚様体(EB)プロトコルで神経前駆細胞を作製し、さらにSTEMdiff™ Forebrain Neuron Differentiation Kit と Maturation Kitで前脳型ニューロンに分化、成熟させた。
(A)iPS細胞由来の神経前駆細胞をSTEMdiff™ Forebrain Neuron Differentiation Kitで7日間、STEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Kitで14日間培養した後、前脳型ニューロンが形成された。得られた培養物には、(B)クラスIIIβ-チューブリン陽性ニューロン(緑)の非常に純粋な集団が含まれる一方、(C)アストロサイト(GFAP陽性細胞、赤)は10%未満であった。(D)核はDAPI(青)で標識した。
NPCからニューロンへの下流分化が可能
(A) mTeSR™1で培養されたヒト多能性幹細胞(hPSC)STiPS-R038株から、STEMdiff™ SMADi Neural Induction Kitを用いてEBプロトコルで作製したNPCを、STEMdiff™ Forebrain Neuron Differentiation Kitを用いて7日間、さらにSTEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Kitを用いて14日間培養し、皮質ニューロンへと分化・成熟させた。得られた培養物には、(B) クラスIII β-チューブリン陽性ニューロン(緑)の高純度集団が含まれ、GFAP陽性アストロサイトは10%未満(図示せず)であった。(C) これらのニューロンはFOXG1発現(赤)も陽性で、前脳型を示した。(D) 核はHoechst(青)で染色した。
前脳型皮質ニューロン混合集団を作製
iPS細胞由来NPC(AIW002-02株)から作製された前脳型ニューロンを、STEMdiff™ Forebrain Neuron Differentiation Kitを用いて7日間培養した後、STEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Kitを用いて6週間成熟させた。得られた培養物には、興奮性ニューロンのグルタミン酸作動性マーカー VGLUT1を発現するニューロン(緑)と、成熟ニューロンを示すMAP2陽性ニューロン(マゼンタ)が混在している。核はHoechst(青)で標識した。データ提供:マギル大学 神経早期創薬ユニット(EDDU)のCecilia Rocha氏。
hPSC由来アストロサイトとの共培養による細胞間相互作用モデル
H1細胞株由来のNPCを、STEMdiff™ Astrocyte DifferentiationおよびMaturation Kitを用いてアストロサイトへと分化させた。H9細胞株由来のNPCを、STEMdiff™ Forebrain Neuron DifferentiationおよびMaturation Kitを用いて前脳型ニューロンへと分化させた。共培養では、成熟アストロサイトを、STEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Mediumで1週間以上培養した前脳ニューロン上に播種した。その翌日、培地をSTEMdiff™ Forebrain Neuron Maturation Mediumに切り替え、以降の培養に用いた。(A) 共培養と同じ給餌スケジュールで単独培養したニューロンをDCX(緑)で標識した。(B) DCX陽性ニューロン(緑)とアストロサイト(GFAP、赤)は、解析前に少なくとも1~2週間は共培養できる。
hPSC由来アストロサイトと共培養したニューロンの生存および成熟
STiPS-R038細胞株由来のNPCを、STEMdiff™ Astrocyte DifferentiationおよびMaturation Kitを用いてアストロサイトへと分化させた。STiPS-M001細胞由来のNPCを、STEMdiff™ Forebrain Neuron DifferentiationおよびMaturation Kitを用いて前脳型ニューロンへと分化させた。1週間の共培養後、ニューロンは(A)ImageJ用NeuriteTracerプラグイン(M Pool et al. J Neurosci Methods, 2008)によりMAP2陽性ニューロンを測定した結果、神経突起伸長が有意に増加しており、(B)同じ給餌スケジュール下で単独培養したニューロンよりも数が多かった。*, p < 0.05;**, p < 0.01。
共培養の手順はこちら:
ニューロン‐アストロサイト共培養プロトコル(STEMCELL Technologies社ウェブサイト)
ニューロン‐ミクログリア共培養プロトコル(STEMCELL Technologies社ウェブサイト)
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