STEMCELL Technologies STEMdiff STEMdiff Microglia Differentiation Kit

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STEMdiff Microglia Culture System は、Mathew Blurton-Jonesの研究室のプロトコル(Abud et al.,2017)に基づいて作成されております。STEMdiff Microglia Differentiation Kit とSTEMdiff Microglia Maturation Kitを用いることで、ヒト多能性幹細胞(hPSC)からSTEMdiff™Hematopoietic Kit(ST-05310)を用いて分化させた前駆細胞ミクログリアへ分化および成熟させることができます。 培養後は、純度の高いミクログリア(> 80%CD45 / CD11b陽性、> 50%TREM2陽性ミクログリア; < 20%形態学的に異なる単球またはマクロファージを得ることができ、派生した細胞は、神経炎症のモデル化、人間の神経学的発達と疾患の研究、共培養アプリケーション、および毒性試験のための多目的なツールとしてご使用いただくことができます。

2018/05/14 12:00の製品情報

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本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。

製品の特長

STEMdiff™ Microglia Culture Systemの概略図

ミクログリア前駆体は、hPSC由来の造血前駆細胞から24日で生成できます。 造血前駆細胞の生成については、STEMdiff™Hematopoietic Kit(ST-05310)を参照してください。 ミクログリア前駆体の機能的ミクログリアへの成熟については、製品情報資料に詳細に関する記載があります。

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データ

STEMdiff™ Microglia Culture System において生成されたミクログリアは、公開されている分化や成熟時の遺伝子発現のパターンと類似しています。

RNA-seqデータセットは、hPSC由来のミクログリアから作成し、その転写プロファイルを他の免疫細胞系(N = 500遺伝子)と比較した4つの異なる公開データ(プロトコルA〜D)から抽出されたものと比較しました。 主成分分析(PCA)は、STEMdiff™Microglia Culture Systemで生成されたミクログリアからのRNA-seqデータと共に解析されました。 STEMdiff™Microglia Culture SystemのhPSC由来のミクログリアは、プロトコルAおよびBのミクログリアに最も近いということが示されます。

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STEMdiff™ Microglia Culture Systemは、34日目に貪食作用を示すミクログリアを生成します

250μg/ mL(small dots)の濃度でpHに敏感なバイオインジケーター粒子を取り込むミクログリアを、生細胞イメージングで12時間にわたって測定しました。 粒子が貪食されると、細胞は赤に変わります。 時間が経つにつれて、小さな点の数が減少し、赤血球の数が増加して凝集しました。Scale bar = 100μm.

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技術資料

よくある質問

STEMdiff Neuralはガラス底で使用できますか?

本製品のガラス底96ウェルプレートでの使用につきまして、STEMCELL Technologies社では評価しておりませんが、poly-L-ornithine (for neurons) およびMatrigel hESC-qualified Matrix (for astrocytes)でプレートをコーティングできれば、お試しいただけると考えております。
ガラス面への細胞接着が上手くいくかどうかは、ガラスの種類、ラミニンの濃度、poly-L-ornithineを希釈するバッファーなど、いくつかの因子に依存します。
STEMCELL Technologies社のプロトコールを元に、ガラスに最適な条件をまずはご検討ください。

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STEMdiff APEL2 MediumでヒトiPS細胞から血球分化する際に、PFHMの添加が必要ですか?

ヒトiPS細胞からの血球分化の際には5% PFHM (Gibco® PFHM-II, Thermo Fisher Catalog #12040077)の添加が必要な可能性が高いです。
ただし、予め条件検討をお願いいたします。
添加する場合は5 mLのPFHMを100 mLのAPEL2に加えてください。

※ ヒトiPS細胞から造血前駆細胞へ分化させる培地「STEMdiff Hematopoietic Progenitor」(製品コード:ST-05310)もございますのであわせてご検討ください。

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劇 毒物及び劇物取締法の「劇物」(法第2条別表第2)を含む製品です。
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