STEMCELL Technologies STEMdiff STEMdiff Microglia Differentiation Kit

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STEMdiff Microglia Culture System は、Mathew Blurton-Jonesの研究室のプロトコル(Abud et al., 2017)に基づいて作成されております。
STEMdiff Microglia Differentiation Kit(ST-100-0019)とSTEMdiff Microglia Maturation Kit(ST-100-0020)を用いることで、ヒト多能性幹細胞(hPSC)からSTEMdiff™ Hematopoietic Kit(ST-05310)を用いて分化させた造血前駆細胞から、ミクログリアへ分化および成熟させることができます。培養後は、純度の高いミクログリア(> 80% CD45 / CD11b陽性、> 50% TREM2陽性ミクログリア; < 20% 形態学的に異なる単球またはマクロファージ)を得ることができます。
これらの製品によって得られる細胞は、神経炎症のモデル化、ヒトの神経学的発達と疾患の研究、共培養アプリケーション、および毒性試験のための多目的なツールとしてご使用いただくことができます。

2018/05/14 12:00の製品情報

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本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。

製品の特長

特長

  • 造血前駆細胞(HPC)の90%以上がミクログリアに分化します
  • STEMdiff™ Hematopoietic Kitを用いて生成されたHPCと互換性があり、STEMdiff™ 神経オルガノイドとの共培養が可能です
  • マクロファージや単球の混入を抑えた分化が可能です
  • 生成されたミクログリアは食作用と活性化を示します
  • シンプルで簡単なフォーマットでご提供します

STEMdiff™ Microglia Culture Systemの概略図

ミクログリア前駆体は、hPSC由来の造血前駆細胞から24日で生成できます。 造血前駆細胞の生成については、STEMdiff™ Hematopoietic Kit(ST-05310)を参照してください。 ミクログリア前駆体の機能的ミクログリアへの成熟については、製品情報資料に詳細に関する記載があります。

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データ

STEMdiff™ Microglia Culture System で生成されたミクログリアの分化と成熟時の遺伝子発現パターンは、公開されているプロトコルのものと類似しています

RNA-seqデータセットは、hPSC由来のミクログリアから作成し、その転写プロファイルを他の免疫細胞系(N = 500遺伝子)と比較した4つの異なる公開データ(プロトコルA〜D)から抽出されたものと比較しました。主成分分析(PCA)は、STEMdiff™ Microglia Culture Systemで生成されたミクログリアからのRNA-seqデータと共に解析されました。STEMdiff™ Microglia Culture SystemのhPSC由来のミクログリアは、プロトコルAおよびBのミクログリアに最も近いということが示されます。

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STEMdiff™ Microglia Culture Systemは、34日目に貪食作用を示すミクログリアを生成します

濃度250 μg/mLのpH感受性バイオインジケーター粒子(小さな点)を取り込むミクログリアを、生細胞イメージングで12時間にわたって測定しました。粒子が貪食されると、細胞が赤に変わります。時間が経つにつれて、小さな点の数が減少し、赤い細胞の数が増加して凝集しました。Scale bar = 100 μm.

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技術資料

よくある質問

STEMdiff Neuralはガラス底で使用できますか?

本製品のガラス底96ウェルプレートでの使用につきまして、STEMCELL Technologies社では評価しておりませんが、poly-L-ornithine (for neurons) およびMatrigel hESC-qualified Matrix (for astrocytes)でプレートをコーティングできれば、お試しいただけると考えております。
ガラス面への細胞接着が上手くいくかどうかは、ガラスの種類、ラミニンの濃度、poly-L-ornithineを希釈するバッファーなど、いくつかの因子に依存します。
STEMCELL Technologies社のプロトコールを元に、ガラスに最適な条件をまずはご検討ください。

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STEMdiff APEL2 MediumでヒトiPS細胞から血球分化する際に、PFHMの添加が必要ですか?

ヒトiPS細胞からの血球分化の際には5% PFHM (Gibco® PFHM-II, Thermo Fisher Catalog #12040077)の添加が必要な可能性が高いです。
ただし、予め条件検討をお願いいたします。
添加する場合は5 mLのPFHMを100 mLのAPEL2に加えてください。

※ ヒトiPS細胞から造血前駆細胞へ分化させる培地「STEMdiff Hematopoietic Progenitor」(製品コード:ST-05310)もございますのであわせてご検討ください。

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毒 毒物及び劇物取締法の「毒物」(法第2条別表第1)を含む製品です。
劇 毒物及び劇物取締法の「劇物」(法第2条別表第2)を含む製品です。
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向 麻薬及び向精神薬取締法の「麻薬向精神薬原料」(法第2条の7、別表第4)を含む製品です。