STEMCELL Technologies TeSR TeSR-AOF
- 研究用
TeSR™-AOFは、ヒト胚性幹（ES）および人工多能性幹（iPS）細胞をフィーダーフリー培養で維持および増殖する、動物由来フリー（animal origin-free; AOF）の安定化された無血清培地です。培地組成は、ヒトES/iPS細胞用フィーダーフリー培地として論文発表数が最多のTeSR™（Ludwig TE et al. 2006）に基づいています。
TeSR™-AOFを使用すれば、ご自身のスケジュールに合わせて、ウイルス安全性を確保した高品質なヒト多能性幹細胞（hPSC）を細胞株を問わず安定して培養できます。特に、制限給餌期間中の細胞品質を高めるように、線維芽細胞成長因子2（FGF2;塩基性FGF [bFGF]）を含む重要な培地成分が安定化されているため、毎日の給餌または制限された給餌のどちらの培養スケジュールにおいても、細胞の品質と性能を同等に維持できます。
TeSR™-AOFは、Corning® Matrigel® hESC-Qualified Matrix (Corning Catalog #354277)、VitronectinXF™（ST-07180）、Biolaminin 521 LN（BLA-LN521-02）など、さまざまな培養マトリックスに適合します。
本品とその構成要素の製造には、少なくとも二次的な製造レベルまで、動物またはヒト由来の材料は使用されていません。このため、製造の一次レベルのみ動物由来フリーの培地と比較して、トレーサビリティとウイルス安全性がより強化されております。TeSR™-AOF完全培地の調製に使用する TeSR™-AOF 20X Supplementの各ロットは、ヒト多能性幹細胞を使用した培養アッセイで性能試験されています。
本品はcGMPのもとで製造され、再現性の高い結果を保証するために最高の品質と一貫性を備えています。
2018/05/14 12:00の製品情報
本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。
製品の特長
TeSR™-AOFで、ヒト多能性幹細胞を動物由来フリーかつフィーダーフリーの安定化条件で維持培養
- 動物由来フリー
製造の二次レベルまで動物原料を含まない培地を選択することにより、補助材料選択におけるリスクを軽減 - 一貫した細胞増殖
高品質のコロニー形態、安定した細胞接着、および細胞増殖をサポート - 安定化された培地組成
FGF2を含む安定化された成分が、高い細胞品質を維持したまま給餌スケジュールの変更を可能に
データ紹介
制限された給餌スケジュール下でも、hPSCの品質と増殖速度を維持
図1A. TeSR™-AOFで維持したhPSCは、毎日の給餌および制限した給餌スケジュールの両方で似たコロニー形態を示す
hPSCをVitronectin XF™上で5回継代し維持した。位相差画像を、播種後7日目に撮影した。制限給餌の場合、継代後2日目に2倍量（4 mL）の培地を給餌し、その後2日連続で給餌を行わず、5日目に1倍量（2 mL）を給餌し、6日目または7日目に継代した。
図1B. TeSR™-AOFで毎日の給餌と制限した給餌スケジュールで維持されたhPSCの増殖速度は同等
hPSCをVitronectin XF™上で5回継代し維持した。各継代の終わりに、Nucleocounter® NC-200 ChemoMetec自動細胞カウンターでDAPI染色核をカウントし細胞数を算出した。log2変換した累積増殖倍率を、培養時間（日数）に対してプロットした。
37℃での培養中、培地成分は長時間にわたり安定
図2. TeSR™-AOF中のネイティブなbFGFレベルは37°Cで安定化
TeSR™-AOFおよびTeSR™-E8™を37°Cで24、48、72時間インキュベートした。FGF2レベルをMeso Scale Discovery（MSD）免疫測定法で測定し、データを各培地のt = 0レベルに正規化した。TeSR™-AOFの37°CにおけるFGF2は、72時間後にt=0の36.7±5.61%が残存している。データは、n=3の生物学的複製の代表±SD。
制限給餌で培養中も、hPSCのコロニー形態を維持
図3. TeSR™-AOFで制限した給餌により培養したhPSCは、古典的なコロニー形態を示す
TeSR™-AOFで維持されたhPSCを、6〜7日ごとに継代試薬 ReLeSR™を用いて凝集体として10回以上継代した。TeSR-AOF™で維持されたhPSCは、hPSC様の形態を示し、滑らかな縁を持つ密度の高い円形のコロニーを形成する。hPSCを特徴づける均一な細胞形態、大きい核、わずかな細胞質が見られる。
低タンパク条件下のhPSCの接着と増殖を改善
図4. TeSR™-AOFで維持されたhPSCでは、低タンパク質培地と比べて接着と増殖が改善される
（A）TeSR™-AOFで培養されたhPSCは、低タンパク培地（TeSR™-E8™）で維持されたhPSCより高いプレーティング効率を示す。プレーティング効率は、既知数の凝集体を播種し、7日目に樹立されたコロニー数と比較することで算出した。（B）TeSR™-AOFで維持されたhPSCは、TeSR™-E8™と比べて継代あたりの平均増殖倍率がより高い。（C）TeSR™-AOFで培養したhPSCは、評価したESおよびiPS細胞株間で一貫した増殖および最小限の細胞株間変動を示した。継代1～5回の累積増殖倍率を測定した。データは10回の継代にわたるプレーティング効率または増殖倍率の平均 ± SDで示した。MG = Matrigel®; VN = Vitronectin XF™。
制限給餌で培養したhPSCは、正常な核型を保持
図5. TeSR™-AOFで制限給餌により培養したhPSCは正常な核型を維持する
TeSR™-AOFで培養されたES細胞（H9およびH1株）、iPS細胞（STiPS-M001およびSTiPS-F016株）を10回以上継代し、hPSC Genetic Analysis KitおよびGバンディングを用いて染色体異常をスクリーニングした。（A）代表例として、H1 ES細胞株とSTiPS-F016 iPS細胞株の継代11回目および13回目では、Gバンディングにより正常な核型が示された。（B）H1 ES細胞株とSTiPS-F016 iPS細胞株の継代10回目では、hPSC Genetic Analysis Kitにより、一般的な染色体異常は検出されなかった。
hPSCは未分化マーカーを発現し、3胚葉に分化
図6. hPSCs Cultured in TeSR™-AOFで培養されたhPSCは未分化状態のマーカーを発現し、3胚葉に分化する
(A) TeSR™-AOFで維持されたhPSCは継代5回と10回において、フローサイトメトリー解析により高いレベルのTRA-1-60およびOCT4を示す。細胞株（n=5）の平均で、TRA-1-60は92.8 ± 3.77%、OCT-4は98.1% ± 1.79%の陽性率となった。データは、各細胞株の継代5回目におけるフローサイトメトリー10回の結果の平均を示した。MG = Matrigel®; VN = Vitronectin XF™. (B) TeSR™-AOFで5回継代して維持したESおよびiPS細胞株は、3胚葉へと効率的に分化した。STEMdiff™ Definitive Endoderm Kitを用いて5日間分化させた培養物をフローサイトメトリー用に処理し、CXCR4+/SOX17+細胞を評価した。STEMdiff™ Mesoderm Induction Mediumを用いて5日間分化させた培養物をフローサイトメトリー用に処理し、Brachyury (T)+/OCT4-細胞を評価した。STEMdiff™ Neural Induction Mediumを用いて7日間、単層分化させた培養物をフローサイトメトリー用に処理し、PAX6+/Nestin+細胞を評価した。
hPSCは、心筋細胞に効率良く分化する
図7. TeSR™-AOFで培養したhPSCは、STEMdiff™ Cardiomyocyte Differentiation Kitにより心筋細胞へ分化
TeSR™-AOFで維持したESおよびiPS細胞株は、STEMdiff™ Cardiomyocyte Differentiation Kitを用いて効率的に心筋細胞へと分化した。心トロポニンT（cTnT）の発現を免疫細胞化学（ICC）およびフローサイトメトリーで評価した。
データは、以下リンクでもご覧ください。
動画のご紹介
ヒト多能性幹細胞（hPSC）の生物学の概要、hPSCの品質と特性を評価する方法、プレートコーティング、培地の選択肢、継代から凍結保存までhPSC培養を維持する方法を動画で紹介
（動画の視聴にはSTEMCELL Technologies社ウェブサイトにて登録が必要です）
