STEMCELL Technologies STEMdiff STEMdiff Hematopoietic Kit
- 研究用
STEMdiff™ Hematopoietic Kit（製品コード：ST-05310）は、ヒト多能性幹細胞（hPSC）から造血前駆細胞（hematopoietic progenitor cell; HPC）を作製する無血清培地です。血清とフィーダーのない条件下で、シンプルかつ再現性の高いプロトコルによって、CD34、CD45、およびCD43を発現する機能性のHPCに分化させます。
2段階からなる堅牢なプロトコルでは、初めにhPSCを中胚葉へ誘導し、続いてHPCへ分化させます。培養開始から12日後に、CD34+CD45+ 前駆細胞を25〜65％（平均43％）含む造血細胞集団を回収できます。この集団には、コロニー形成単位（CFU）アッセイで機能する造血コロニーを形成できる前駆細胞が含まれます。
本品は、以下の培地で維持されたhPSCからの分化に最適化されています。
・mTeSR™1（ST-85850）
・mTeSR™ Plus（ST-100-0276）
・TeSR™-E8™（ST-05990）
2018/05/14 12:00の製品情報
本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。
製品の特長
STEMdiff™ Hematopoietic Kitで、hPSCから造血前駆細胞 (HPC) へ分化誘導
- 明確な組成 無血清、フィーダーフリーの培地
- 使い易さ 単層培養から遊離した浮遊状態のHPCを回収
- 迅速 hPSCから12日間でHPCを作製
- 高収量 1キットあたり 4 - 18 x 106 個の CD34+CD45+ HPCを作製
- 柔軟性 複数のhPSC株から安定してHPCを作製
造血分化のワークフロー
培養開始の1日前（Day -1）、ヒト多能性幹細胞（hPSC）のコロニーを収穫し細胞塊の状態で播種する（培地は、mTeSR™1、mTeSR™ Plus、またはTeSR™-E8を使用）。翌日（Day 0）、培地をMedium A（STEMdiff™ Hematopoietic Basal MediumにSupplement Aを添加）に交換し、細胞を中胚葉様の状態へ誘導開始する。培養開始から2日目（Day 2）に、新鮮なMedium Aで培地の半量を交換する。同3日目、培地をMedium B（STEMdiff™ Hematopoietic Basal MediumにSupplement Bを添加）に交換し、5、7、10日目に半量ずつ交換して造血細胞への分化をさらに促進させる。通常、12日目までに培養上清から大量のHPCを回収できる。
データ紹介
造血細胞マーカーを発現するHPCを効率良く強力に作製
ヒトES細胞（H1、H9株）およびiPS細胞（WLS-1C、STiPS-F016、STiPS-M001、STiPS-B004株）をSTEMdiff™ Hematopoietic Kitで12日間培養し、上清から回収した細胞の造血マーカー発現をフローサイトメトリーで解析した。CD34+CD45+細胞の割合と総数を、平均 ± SEMで示した（n ≥ 3）。
hPSC由来HPCは、さまざまな系列の造血コロニーを産生
![05310-cfuassay[1].jpg](/products/images/05310-cfuassay%5B1%5D.jpg)
造血分化プロトコルの12日目に培養上清から回収したhPSC由来HPCを、メチルセルロース培地のMethoCult™ H4435 Enriched（ST-04435）に播種してコロニー形成単位（CFU）アッセイで評価した。
（A）6つの異なるhPSC株におけるCFU頻度（平均 ± SEM; n ≥ 3)。CFU頻度は細胞株間で変動し、播種したHPC10,000個あたり平均で約120CFUであった。
（B）CFUアッセイで観察された前駆細胞タイプには、顆粒球/マクロファージ（CFU-M、CFU-G、CFU-GM）、赤血球（BFU-E、CFU-E）、わずかな混合（CFU-GEMM）の各コロニーが含まれていた。画像では代表的なコロニーを40倍で示した。
詳しいデータは、学会発表ポスター（STEMCELL Technologies社）をご覧ください。
