STEMCELL Technologies STEMdiff STEMdiff Endothelial Differentiation Kit
- 研究用
STEMdiff™ Endothelial Differentiation Kit（ST-08005）は、ヒト多能性幹細胞（ES/iPS細胞、hPSC）由来の中胚葉細胞から内皮様細胞へ誘導する無血清培地のキットです。動物性成分フリー (ACF) 組成の内皮誘導培地および接着基質と、無血清・ゼノフリー組成の内皮増殖培地が含まれています。
本品は、Corning® Matrigel® 上で、維持培地のmTeSR™1-cGMP（ST-85850）、mTeSR™ Plus-cGMP（ST-100-0276）、またはTeSR™-E8™（ST-05990）を用いて維持されたhPSCからの内皮様細胞分化に最適化されています。
本品は、STEMdiff™ Mesoderm Induction Medium（ST-05220）でhPSCから初期中胚葉に誘導した直後に使用するのに適しています。
キットに含まれる内皮増殖培地は、STEMdiff™ Endothelial Expansion Medium Kit（ST-08007）としても販売しています。
注：STEMdiff™ Endothelial Expansion Mediumの調製には、Heparin Solution (ST-07980) が別途必要になります。
【関連製品】
Human iPSC-Derived Endothelial Cells（ST-200-0907）
コントロールiPS細胞株由来の高品質なヒト内皮細胞です。
2018/05/14 12:00の製品情報
本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。
製品の特長
＊本品は、hPSC由来の中胚葉から内皮細胞に分化し増殖させる培地です。増殖のみの場合は、STEMdiff™ Endothelial Expansion Medium Kit（ST-08007）をご利用ください。
STEMdiff™ Endothelial Kitsで、hPSC由来内皮細胞を分化および増殖
- hPSC由来の中胚葉から内皮細胞を効率よく作製
- 細胞の濃縮やソーティングが不要
- 血清含有培地に比べて内皮細胞の増殖効率が高い
内皮誘導のワークフロー
ヒト胚性幹（ES）または人工多能性幹（iPS）細胞は、TeSR™維持培地（mTeSR™ Plus、mTeSR™1、またはTeSR™-E8™）で培養します (フェーズ1)。誘導プロトコルの1日目（フェーズ2）に、TeSR™培地をSTEMdiff™ Mesodermal Induction Medium（MIM）に置換して、初期中胚葉前駆細胞への誘導準備を整えます。3日目（フェーズ3）までに、MIMをSTEMdiff™ Endothelial Induction Mediumに置換して内皮細胞を誘導します。7日目（フェーズ4）に、Animal Component-Free Cell Attachment Substrateでプレコートした培養容器とSTEMdiff™ Endothelial Expansion Mediumをもちいて細胞を5〜6倍に継代します。
データ紹介
hPSC由来内皮細胞における内皮マーカー発現
STEMdiff™ Endothelial Induction Mediumで誘導したプロトコル7日目のhPSC（H9株）由来内皮細胞をフローサイトメトリーで分析しました。細胞の85％以上がCD34+で、高レベルにCD31とCD144を発現しました。その後、内皮マーカー（CD34、CD31、CD144）発現細胞の割合は5継代目まで増加し続けました。
機能性をそなえたhPSC由来内皮細胞
STEMdiff™ Endothelial Differentiation Kitで作製したhPSC（F016株）由来の内皮細胞は、10,000細胞/cm2で播種するとアセチル化LDLを取り込みます。チューブ形成アッセイでは、96ウェルプレートに20,000細胞/ウェルで播種し24時間でin vitroの管状ネットワークを形成できます。
血清含有培地より速い内皮細胞の増殖
STEMdiff™ Endothelial Expansion Mediumは血清含有培地と比べて、(A) 後期継代時に拡大率を維持し、(B) hPSC（C1株）由来内皮細胞の増殖が優れています。
hPSC由来内皮細胞における、高レベルのACE2発現
（A）STEMdiff™ Endothelial Differentiation Kitを用いてhPSC（C1株）由来内皮細胞を作製し、STEMdiff™ Endothelial Expansion Mediumを用いて10,000細胞/cm2で6回継代し拡大培養しました。
（B）これらの細胞のアンジオテンシン変換酵素2（ACE2）の発現を分析したところ、85％が高レベルのACE2を発現していました。
