製品の特長

STEMdiff™ T Cell KitでhPSCからT細胞へ分化

• 無血清、フィーダーフリーの組成
• 均一な胚様体（EB）を形成
• さまざまなES/iPS細胞株から、CD4+CD8+ ダブルポジティブT細胞へと安定的に分化

T細胞は適応免疫システムの一部として抗原特異的T細胞受容体（TCR）を介して広範囲の標的を認識し、サイトカイン分泌や細胞殺傷などのエフェクター機能を発揮します。
これまで、T細胞はプライマリーの細胞から分離されたものが多く使用されてきました。この一つの理由は、iPS細胞から分化誘導する際にCD34陽性造血前駆細胞の誘導効率が低く、安定的にT細胞まで誘導できなかったことがあります。
この課題を克服するためSTEMCELL Technologies社では、シングルセルによる誘導ではなく均一な胚様体（EB; Embryoid Body）を形成させること、また得意分野の細胞分離技術を取り入れることで高効率の誘導に成功しました。ヒト多能性幹細胞（iPS細胞）からの培養系では免疫細胞を大量に供給することが可能となり、プライマリーの細胞と比べて個体間差も抑えることができます。

T細胞分化のワークフロー

1. STEMdiff™ Hematopoietic-EBによる造血前駆細胞分化

hPSCを回収してシングルセル懸濁液に解離してから、EB形成培地（EB Medium A +10 μM Y-27632）をもちいてAggreWell™プレートに播種し、600細胞の凝集体を形成します。中胚葉形成後（培養開始から3日目）、培地をEB Medium Bに交換し、造血系への分化を誘導します。5日目に、EBを組織培養処理されていないプレートへ移します。12日目にEBを回収して解離し、CD34+細胞をEasySep™をもちいて濃縮します。

2. StemSpan™によるT細胞分化

hPSC由来のCD34+細胞を、StemSpan™ Lymphoid Progenitor Expansion Mediumをもちいて、StemSpan™ Lymphoid Differentiation Coating Materialでコーティングしたプレート上に播種します。播種から14日目に、リンパ系前駆細胞の段階で細胞を回収し、CD4+CD8+二重陽性（DP）T細胞にさらに分化させるために、StemSpan™ T Cell Progenitor Maturation Mediumをもちいて、コーティング済みのプレート上に再播種します。28日目にDP T細胞を回収します。

（オプション）DP T細胞は、ImmunoCult™ T Cell Activatorを添加した培地で7日間延長培養することで、 さらにCD8+ SP T細胞へと成熟させることが可能です。