製品の特長

STEMdiff™ NK Cell KitでhPSCからNK細胞へ分化

• 無血清、フィーダーフリーの組成
• 均一な胚様体（EB）を形成
• さまざまなES/iPS細胞株から、CD56+ NK細胞へと安定的に分化

NK細胞は、病原体と腫瘍に対する防御を担うリンパ球です。炎症性サイトカインの分泌と、癌性細胞またはウイルス感染細胞を殺す能力により、自然免疫において重要な役割を果たします。
これまでNK細胞は、プライマリーの細胞から分離されたものが多く使用されてきました。その理由の1つは、iPS細胞から分化誘導する際にCD34陽性造血前駆細胞の誘導効率が低く、安定的にNK細胞まで誘導できなかったことにあります。
この課題を克服するためSTEMCELL Technologies社では、シングルセルによる誘導ではなく均一なEBを形成させること、また得意分野の細胞分離技術を取り入れることで高効率の誘導に成功しました。ヒト多能性幹細胞（iPS細胞）からの培養系では免疫細胞を大量に供給することが可能となり、プライマリーの細胞と比べて個体間差も抑えることができます。

NK細胞分化のワークフロー

1. STEMdiff™ Hematopoietic-EBによる造血前駆細胞分化

hPSCを回収してシングルセル懸濁液に解離してから、EB形成培地（EB Medium A +10 μM Y-27632）をもちいてAggreWell™プレートに播種し、600細胞の凝集体を形成します。培養開始から2日目にEB Medium Aで培地を半量交換します。中胚葉形成後（3日目）に、培地をEB Medium Bに交換して造血系への分化を誘導します。5日目に、EBを組織培養処理されていないプレートへ移します。12日目にEBを回収して解離し、CD34+細胞をEasySep™をもちいて濃縮します。

2. StemSpan™ によるNK細胞分化

hPSC由来のCD34+細胞を、StemSpan™ Lymphoid Progenitor Expansion Mediumをもちいて、StemSpan™ Lymphoid Differentiation Coating Materialでコーティングしたプレート上に播種します。播種してから14日目にリンパ系前駆細胞の段階で細胞を回収し、StemSpan™ NK Cell Differentiation Mediumをもちいて、コーティングされていないプレート上に再播種しNK細胞へと分化させます。28日目にNK細胞を回収します。