STEMCELL Technologies PneumaCult PneumaCult-Ex Plus Medium

研究用

「PneumaCult™による呼吸器ウイルス感染の研究」最新情報

PneumaCult™-Ex Plus Medium（ST-05040）は、初代ヒト気道上皮細胞増殖のための、血清とBPEを含まない明確な組成の培地です。他の市販増殖培地と比べて初代ヒト気道上皮細胞の継代ごとの増殖に優れています。
本品は細胞増殖時に従来より少なくとも2回多く継代することができます。また、PneumaCult™-ALI Medium（ST-05001）を用いて気液界面（Air-Liquid Interface, ALI）に偽重層粘膜繊毛上皮を形成する能力、あるいはPneumaCult™-ALI-S Medium （ST-05050）を用いて立方上皮を形成する能力として定義される、より優れた分化能を持つ細胞を得ることができます。

PneumaCult™-Ex Plusは、PneumaCult™-ALI または PneumaCult™-ALI-Sとともに、in vitroヒト気道モデルのための完全に統合されたBPEフリー培養システムを構成します。この堅牢で明確な組成のシステムは、呼吸器の基礎研究、毒性研究、そして薬剤開発のための有用なツールです。

2018/05/14 12:00の製品情報

本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。

製品の特長

PneumaCult-Ex Plusをもちいて、無血清・BPEフリー条件下でヒト気道上皮細胞を増殖できます

血清とBPEを含まない組成のため、一貫した性能を発揮します
他の市販の増殖用培地に比べ、継代ごとの細胞増殖が優れています
PneumaCult™-ALI または PneumaCult™-ALI-S 培地との併用によって、長期継代後でも気液界面でのより優れた分化能が得られます

PneumaCultによる培養の流れ

図 1. PneumaCult™をもちいた培養の流れ

PneumaCult™-Ex Plus（または-Ex）を使用した液内培養で、ヒト気管支上皮細胞（HBEC）を拡大します。気液界面（ALI）培養初期の「拡大フェーズ」では、PneumaCult™-Ex Plus（または-Ex）を頂端および基底チャンバーに添加します。コンフルエンスに達したら両チャンバーから培地を取り除き、PneumaCult™-ALIを基底チャンバーのみに添加することにより、培養物をエアリフト（頂端側を空気に触れさせる）します。21〜28日のインキュベーション後に偽重層粘液線毛上皮への分化が見られ、1年以上維持できます。

データ紹介

図 2. PneumaCult™-Ex Plus で培養したヒト気管支上皮細胞（HBEC）の増殖速度は、PneumaCult™-Ex および他社培地に比べて速い

市販の凍結保存されたP1 HBECを、PneumaCult™-Ex Plus、PneumaCult™-Ex、または他社培地に播種しました。PneumaCult™-Ex Plusで培養された細胞は、他の培地で維持されたものと比べて9継代にわたり有意に高い増殖率を示します（n = 6）。

図 3. HBECsの代表的な形態

PneumaCult™-Ex Plus、PneumaCult™-Ex、または他社培地で培養されたP4 HBECの代表的な培養画像。PneumaCult™-Ex Plus（A）で培養された細胞は、PneumaCult™-Ex（B）または他社培地（C）で培養された細胞よりも小さく、より密に詰まっています。すべての画像は、10倍の対物レンズを使用して撮影されました。

図 4. PneumaCult™-Ex Plusで培養されたHBECsは、基底細胞マーカーであるCD49fとCD271の広範囲な発現を維持する

PneumaCult™-Ex Plus（A, D）、PneumaCult™-Ex（B, E）、および他社培地（C, F）で培養されたP4 HBECsにおいて、基底細胞マーカー CD49f (A, B, C) および CD271 (D, E, F)を免疫細胞化学で検出しました。すべての画像は、10倍の対物レンズを使用して撮影されました。

図 5. PneumaCult™-Ex Plusで培養されたHBECsは、CD271⁺CD49f⁺ 細胞の割合がより高い

PneumaCult™-Ex Plus (A), PneumaCult™-Ex (B), および他社培地 (C) で培養されたP4 HBECsにおいて、基底細胞マーカー発現をフローサイトメトリーで検出しました。PneumaCult™-Ex Plusでは他の培地より高い割合でCD49fとCD271の共発現細胞が存在していました。

図 6. PneumaCult™-Ex Plusで培養されたHBECsでは、PneumaCult™-ALIを用いた偽重層粘液線毛上皮への分化が改善した

PneumaCult™-Ex Plus, PneumaCult™-Ex, または他社培地にP4のHBECs を播種した後、P5からP8でPneumaCult™-ALIをもちいてALI分化させました。エアリフトから28日後のALI培養物を固定し、繊毛（AC-tubulin、赤）と杯細胞（Muc5AC、緑）のマーカーに対する抗体で染色しました。核はDAPI（青）で対比染色しました。すべての画像は、20倍の対物レンズを使用して撮影されました。

図 7. 分化させたHBECs (P4)の電気生理的な特徴

PneumaCult™-Ex Plus, PneumaCult™-Ex, または他社培地で拡大培養したHBECsをPneumaCult™-ALIでALI培養し、エアリフトから28日後の経上皮電気抵抗 (TEER) (A) 、およびイオンチャネル活動の代表的特徴 (B)を示しています。
Amiloride: ENaC inhibitor. IBMX and Forskolin: CFTR activators. Genistein: CFTR potentiator. CFTRinh-172: CFTR inhibitor. UTP: Calciumactivated Chloride channels (CaCCs) activator.

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