製品の特長

ImmunoCult™-SF Macrophage Mediumをもちいて、無血清条件でヒト単球をマクロファージへと分化できます

• 無血清培地で、血清添加も不要です
• マクロファージ分化を強力にサポートします
• 望ましいフェノタイプと機能を備えたマクロファージを高収量で取得できます
• わずか6日で、M1またはM2マクロファージを回収できます

本品に含まれる成分

• Iscove’s MDM
• ウシ血清アルブミン（試験済み）
• 組み換えヒトインスリン
• ヒトトランスフェリン (iron-saturated)
• 2-メルカプトエタノール
• 添加物

マクロファージ分化のワークフロー

図1. M1またはM2a活性化マクロファージ作製のプロトコル

ImmunoCult™ SF Macrophage Differentiation Medium（ImmunoCult™ SF Macrophage Medium (ST-10961) にヒト組換えM-CSF (ST-78057) を添加したもの）で細胞を培養することにより、単離された単球から単球由来マクロファージ（MDM）を作製します。
8日間のプロトコル (下段) では、4日目に新鮮なImmunoCult™-SF Macrophage Differentiation Mediumを補充し、6日目に適切な刺激を使用して特定のマクロファージ活性化を促進します（M1活性化にはIFN-γ + LPS、M2a活性化にはIL-4）。 8日目に完全に成熟したM1またはM2aマクロファージを、下流アプリケーションで使用するために回収します。
6日間のプロトコル (上段) では、マクロファージ活性化を4日目の補充ステップと同時に実行でき、6日目に回収します。

データ紹介

図2. ImmunoCult™-SFは、M1およびM2aマクロファージ収量が他社製無血清培地よりも優れています

単球をImmunoCult™-SF Macrophage Mediumまたは他社の無血清マクロファージ培地で培養し、8日間のプロトコル（図1）を使用してマクロファージに分化させました。8日目にマクロファージを回収、カウントし、フローサイトメトリー分析によりマクロファージマーカーCD80、CCR7、CD206およびCD209の発現を評価しました。
（A）M1マクロファージはCD80+CCR7+、（B）M2aマクロファージはCD206+CD209+の表現型を示しました。マクロファージの収量は、0日目当初の単球数に対する8日目の生細胞総数のパーセンテージで示しています。マクロファージの収量は、他社の無血清培地よりもImmunoCult™-SFの方が有意に高くなりました(P < 0.05, paired t-test; mean ± SEM; n=18-19)。

図3. ImmunoCult™-SFで生成された活性化マクロファージは適切なサイトカインを分泌します

マクロファージをImmunoCult™SF Macrophage Mediumで作製し、8日間のプロトコルでIFN-γ + LPS（M1）またはIL-4（M2a）を使用して活性化しました。8日目に、M1およびM2aマクロファージ培養物から上清を回収し、TNF-α、IL-12（p70）およびIL-10の濃度をELISAによって決定しました。
（A）M1マクロファージは2821 ± 396 pg/ml TNF-α（n = 24）および 656 ± 86 pg/mL IL-12（p70）（n = 25）を分泌しました。
（B）M2aマクロファージは29 ± 6 pg/mL IL-10（n = 21）を産生し、TNF-αを産生しませんでした（検出限界未満、n = 20）。データは平均 ± SEMで示しています。