ラーニングコーナー

2017/08/28

ヒト単球から効率的に成熟樹状細胞（mDC）を回収

細胞分離
用途別細胞培養

樹状細胞（dendritic cell, DC）は最も強力な抗原提示細胞で、免疫応答の重要な調節因子です。癌免疫療法、樹状細胞ワクチン、感染症に対する治療および予防研究で、非常に関心が高まっています。
STEMCELL Technologies社では、単球の分離から未熟樹状細胞（iDC）への分化および成熟（mDC）までをサポートする製品を提供しています。

基本ワークフローと関連製品　概要
単球の分離
DCへの分化・成熟
mDCの解析
関連情報
関連製品

基本ワークフローと関連製品　概要

単球分離から成熟樹状細胞の形成まで1週間で完了
得られたmDCはT細胞増殖能などの機能をもち、炎症性サイトカインIL12を産生

単球の分離

EasySepによるヒト単球の分離

EasySep Human Monocyte Isolation Kit （商品コード：ST-19359）は、新鮮/凍結保存PBMCあるいはアフェレーシスサンプルから単球を最短12.5分でネガティブ分離するキットです。また、キット中の Platelet removal cocktailを使用することで血小板の混入を10分の1に減らすことができます。カラムを使用しないため、細胞へのダメージを最小に抑えます。

EasySep Human Monocyte Isolation Kitでネガティブ分離したヒト末梢血由来単球細胞

※　ヒト全血から単球の分離には、EasySep Direct Human Monocyte Isolation Kit（製品コード：ST-19669）あるいはRosetteSep Human Monocyte Cell（同：ST-15028、ST-15068）もご利用になれます。

DCへの分化・成熟

単球から樹状細胞への分化・成熟の流れ

ImmunoCult-ACF Dendritic Cell Mediumおよびサプリメントを用いて、単球細胞から未成熟DC（iDC）への分化、成熟DC（mDC）を回収することができます。

なぜDCの分化・成熟にimmunoCultか？

成分が明らか：無血清で動物成分不含有
簡便：Ready-to-useでDCの分化と成熟をサポートする最適化された組成
信頼ある結果：希望のフェノタイプと機能を持つmDCを高収率で回収
フレキシブル：培地とサプリメントを別々あるいは一緒に使用可能

単球からDCの分化・成熟

EasySepまたはRosetteSepで分離した単球細胞は、ImmunoCult-ACF Dendritic Cell Differentiation Supplementを添加したImmunoCult-ACF Dendritic Cell Mediumで培養することで、未成熟DC（iDC）へ分化可能です。
さらに、サプリメントをImmunoCult Dendritic Cell Maturation Supplementに変更してiDCを培養すれば、成熟DC（mDC）が得られます。

mDCの解析

ImmunoCultで成熟したDCフェノタイプの評価

DCフェノタイプの解析

培養7日目にCD14とCD83の発現をフローサイトメトリーで解析したところ、93±5%の細胞が成熟DCマーカーのCD83を発現し、CD14を発現した細胞はわずか1±1%でした（mean±SD, n=39）。
成熟DCの回収率は、0日目に生存していた単球数に対する7日目の生存細胞数の割合で、45±25%でした（mean ± SD, n=39）

ImmunoCult Dendritic Cell Maturation Supplementの効果

培養5日目からImmunoCult Dendritic Cell Maturation Supplementを加えた場合（Mature DC）と加えなかった場合（Immature DC）で、7日目における培養上清中のIL-12p70濃度をELISAで測定しました。成熟させたDCの培養上清にIL12 p70が分泌されていることが分かります。