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ラーニングコーナー

2013/11/06

週末の培地交換が不要に!ヒトES/iPS細胞メンテナンスのための新プロトコール

  • 用途別細胞培養

STEMCELL Technologies社の「mTeSR™1」と「TeSR™-E8™」は、ヒトES細胞/iPS細胞(ヒト多能性幹細胞)を維持培養するための世界的標準培地です。「mTeSR1」を用いた標準プロトコールでは、細胞の維持培養のために毎日の培地交換が推奨されており、休日にも培地の交換が必要でした。改善策として培地量を倍にすることにより、1継代あたり1日だけ培地交換をしなくてもいい日を設けられますが、この方法でもやはり週末に1日は作業をしなくてはいけないという制約があります。

「ウィークエンドフリープロトコール」について

STEMCELL Technologies社では、週末の2日間を培地交換する事なく細胞が維持培養できるプロトコール(「ウィークエンドフリープロトコール」)を提供しております。
実施するための重要なポイントはコロニーのサイズと密度を最適化する点にあり、細胞は従来と同等の品質を保つことが可能です。
本プロトコールを適用できる培地は、STEMCELL Technologies社の「mTeSR1」および「TeSR-E8」となっており、基底膜/マトリックスにはCorning Matrigel hESC-qualified matrix、あるいは組成の明確なVitronectin XFがご利用いただけます。

「ウィークエンドフリー」プロトコールの主な特長

  • 週に1回、金曜日に継代
  • 土曜・日曜は培地交換が不要
  • mTeSR1およびTeSR-E8でバリデート済み
  • 基底膜にはMatrigelおよびVitronectin XFが利用可能

 

「ウィークエンドフリー」プロトコールの概要

0759_Weekenf-free_overview.jpg

※リンク先のプロトコールでは、旧来品の製品コードが記述されております。

データ例

コロニーの形態

A・B:
「ウィークエンドフリー」プロトコール(オレンジ)または通常のプロトコール(グレー)で培養したH1 またはH9細胞(●印)、WLS-1C(▲印)およびWLS-4D1(◆印)に対し、継代毎での未分化な細胞コロニーの割合を目視で観察したものです。
A - mTeSR1、B - TeSR-E8で培養。
C・D:
10継代後に未分化コロニーの形態を観察したところ、従来法と同様に観察されました。
C - mTeSR1、D - TeSR-E8で培養。

0759_Weekenf-free_Data1.jpg

 

未分化マーカーの発現

10継代後に未分化幹細胞マーカーの発現を確認したところ、高い発現を維持していることが確認されました。
A・C:mTeSR1、B・D:TeSR-E8で培養。

0759_Weekenf-free_Data2.jpg

 

増殖率の比較

ウィークエンドフリープロトコール(オレンジ)は、従来のプロトコール(グレー)と比較して同等の増殖効率を示しました。
A:mTeSR1、B:TeSR-E8で培養。

0759_Weekenf-free_Data3.jpg

 

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