注目の製品情報
2023/07/25
「MethoCult」 造血コロニーアッセイのゴールドスタンダード
- 用途別細胞培養
MethoCult™（STEMCELL Technologies社）は、培養中の造血前駆細胞の最適な増殖と分化を促進するように配合された、半固形メチルセルロースをベースとする培地です。MethoCult™は、コロニー形成ユニット（CFU）またはコロニー形成細胞（CFC）アッセイにおける造血前駆細胞のin vitro検出および定量化のための「ゴールドスタンダード」です。ヒトおよびマウスをはじめとした造血細胞のCFUアッセイに利用できる、幅広い組成のMethoCult™培地が用意されています。ヒト多能性幹細胞（hPSC）またはラット、非ヒト霊長類、イヌに由来する造血細胞に使用できる製品もあります。
【動画のご紹介】
造血の概要、ヒト造血幹細胞および前駆細胞の同定・定量に使われるさまざまな機能アッセイの講義や、ヒト造血CFUアッセイでコロニーを特定・カウントする手順を紹介した動画はこちら＞＞＞
（動画の視聴にはSTEMCELL Technologies社 ウェブサイトでの登録が必要です。）
MethoCult™ブランドの歴史
MethoCult™とSTEMCELL Technologies社はともに、カナダにあるBritish Columbia Cancer Agencyで血液/腫瘍研究を行うTerry Fox Laboratoryが始めた培地調製サービスから誕生しました。20年以上を経た今、MethoCult™は造血コロニーアッセイで使用される最も論文発表実績のあるメチルセルロースベース培地です。
MethoCult™によるCFUアッセイとは？
コロニー形成ユニット（CFU）アッセイは、骨髄、血液、その他の造血組織における造血前駆細胞（HPC）の機能、すなわち多分化性と系列特異性を検出するin vitroアッセイです。CFUアッセイでは赤血球（CFU-E、BFU-E）、顆粒球/マクロファージ（CFU-GM、CFU-G、CFU-M）および多系統（CFU-GEMM）前駆細胞を異なる系列・成熟度の細胞として検出できます。それぞれがサイズ、形態、細胞組成の異なるコロニーを形成するためです。各コロニーは単一の前駆細胞またはCFUに由来します。
MethoCult<™はHPCの最適な成長と分化を促進するよう配合されたメチルセルロースベースの半固形培地です。MethoCult™を使うことで造血CFUアッセイの標準化に重要な役割を果たします。また、メニスカスフリーの培養ディッシュSmartDish™およびSTEMgrid™-6と併用すれば、より正確な手動コロニーカウントを行えます。あるいは、STEMvision™によってコロニーカウントを自動化することも可能です。CFUアッセイのスキルを向上したい方には、お役に立つサービス（プロフィシエンシーテストなど）もご用意しています。
なぜMethoCult™が支持されるのか？
- 標準化と品質管理 注意深くスクリーニングされた成分で製造
- 一貫性 厳密な性能試験により、優れたロット間再現性を確保
- 便利 総CFUと、赤血球（CFU-E、BFU-E）、顆粒球/マクロファージ（CFU-GM、CFU-G、CFU-M）および多系統（CFU-GEMM）前駆細胞を識別・計数にすぐに使える組成
- 柔軟性 任意の成分を追加できる組成も提供、組成や容量のカスタマイズにも応相談
ヒト用 MethoCult™培地
| 製品 タイプ |
血清含有 | 無血清 | 条件培地 | メチルセルロースベース |
| 主な製品 | ・MethoCult™ Optimum ・MethoCult™ Classic ・MethoCult™ Enriched ・MethoCult™ Express |
・MethoCult™ SF | ・MethoCult™ H4431 ・MethoCult™ H4531 |
・MethoCult™ H4100 |
| 梱包単位 | ・80-100 mL ・3 mL x 24 tubes ・4 mL x 12 tubes |
・80-100 mL | ・100 mL | ・40 mL |
| 血清 | + | - | + | - |
| サイトカイン | ＋ or － | ＋ or － | ＋ or －、EPO | - |
| 対象組織 | ・臍帯血 ・骨髄 ・末梢血 ・アフェレーシス検体 ・精製または培養したHSPC |
・臍帯血 ・骨髄 ・末梢血 ・アフェレーシス検体 ・精製または培養したHSPC ・hPSC由来細胞 |
・臍帯血 ・骨髄 ・末梢血 ・アフェレーシス検体 ・精製または培養したHSPC |
・臍帯血 ・骨髄 ・末梢血 ・アフェレーシス検体 ・精製または培養したHSPC |
| 用途 | ・コロニー形成 - ミエロイド (CFU-G/M/GM) - 混合 (CFU-GEMM) - 赤血球 (CFU-E/BFU-E) |
・明確な組成の培地条件を必要なアッセイ ・混合 (CFU-GEMM) コロニー存在 / 非存在下でミエロイド (CFU-G/M/GM) コロニーを形成 |
・コロニー刺激因子としてAgar-LCMを使用するアッセイ ・コロニー形成 - ミエロイド (CFU-G/M/GM) - 混合 (CFU-GEMM) - 赤血球 (CFU-E/BFU-E) |
・無血清 ・サイトカインフリー条件下で、血清やサイトカインを評価 |
| 特長 | ・EPO含有または不含 ・STEMvision™によるコロニーカウント自動化に対応（図1） ・プロフィシエンシーテストに対応 |
・完全な無血清で、組成が明確 ・EPOやその他サイトカインを含有または不含 |
・血清、サプリメントを含有 ・EPO含有または不含 |
・2.6% メチルセルロース / IMDM培地 ・任意のサイトカインやサプリメントを添加可能 |
*HSPC = 造血幹細胞・造血前駆細胞、hPSC = ヒト多能性幹細胞
ヒト用MethoCultの製品選択について、詳しくはこちら＞＞
マウス用 MethoCult™培地
| 製品タイプ | 血清含有 | 無血清 | メチルセルロースベース |
| 主な製品 | ・MethoCult™ GF M3434 ・MethoCult™ GF M3534 |
・MethoCult™ SF M3236 ・MethoCult™ SF M3436 |
MethoCult™ M3134 |
| 梱包単位 | ・90 または 100 mL ・3 mL x 24 tubes |
100 mL | 80 または 40 mL |
| 血清 | + | - | - |
| サイトカイン | ・組換えSCF、IL-3、IL-6含有 ・EPO 含有 (GF M3434) または 不含 (GF M3534) |
・サイトカイン・EPO 不含 (SF M3236) ・サイトカイン・EPO 含有 (SF M4346) |
・不含 |
| 対象組織 | ・骨髄 ・末梢血 ・脾臓 ・胎仔組織 |
・骨髄 ・末梢血 ・脾臓 ・胎仔組織 |
・骨髄 ・末梢血 ・脾臓 ・胎仔組織 |
| 用途 | ・コロニー形成 - ミエロイド (CFU-G/M/GM) - 混合 (CFU-GEMM) - 赤血球 (CFU-E/BFU-E) |
・赤血球 (BFU-E) コロニー形成 | ・無血清・サイトカインフリー条件下で、血清やサイトカインを評価 |
| 特長 | ・STEMvision™によるコロニーカウント自動化に対応 (図2) | ・STEMvision™によるコロニーカウント自動化に対応 (図2) | ・2.6% メチルセルロース / IMDM培地 ・任意のサイトカインやサプリメントを添加可能 |
マウス用MethoCultの製品選択について、詳しくはこちら＞＞
その他（ラット、サル）用MethoCult
| 動物種 | ラット | ヒト以外の霊長類 |
| 製品 | ・MethoCult™ GF R3774 ・MethoCult™ SF M3436 |
・MethoCult™ Optimim ・MethoCult™ Classic ・MethoCult™ Enriched |
| 梱包単位 | 100 mL | 100 mL |
| 血清 | ＋ | ＋ |
| サイトカイン | ・組換えサイトカイン含有 | ・組換えサイトカイン含有 |
| 対象組織 | ・骨髄 | ・骨髄 ・末梢血 ・精製したHSPC |
| 用途 | ・コロニー形成 - ミエロイド（CFU-G/M/GM） - 赤血球（BFU-E） |
・コロニー形成 |
*HSPC = 造血幹細胞・造血前駆細胞
MethoCultの主要文献 アプリケーション別
正常造血前駆細胞の増殖と分化に対する、内因性および外因性制御因子の効果の研究
Shin J et al. (2014) High c-Kit expression identifies hematopoietic stem cells with impaired self-renewal and megakaryocytic bias. J Exp Med 211(2): 217-31
Zimdahl B et al. (2014) Lis1 regulates asymmetric division in hematopoietic stem cells and in leukemia. Nat Genet 46(3):245-52
Baker S et al. (2014) B-myb is an essential regulator of hematopoietic stem cell and myeloid progenitor cell development. Proc Natl Acad Sci 111(8):3122-7
悪性造血前駆細胞の増殖と分化に対する、内因性および外因性制御因子の効果の研究
Li Q et al. (2013) Oncogenic Nras has bimodal effects on stem cells that sustainably increase competitiveness. Nature504(7478):143-7
Zhu X et al. (2014) Identification of functional cooperative mutations of SETD2 in human acute leukemia. Nat Genet46(3):287-93
Xu J et al. (2014) DNMT3A Arg882 mutation drives chronic myelomonocytic leukemia through disturbing gene expression/DNA methylation in hematopoietic cells. Proc Natl Acad Sci111(7):2620-5
Montes R et al. (2014) Ligand-independent FLT3 activationdoes not cooperate with MLL-AF4 to immortalize/transform cord blood CD34+ cells.Leukemia28(3):666-74
幹細胞移植のための造血細胞検体の評価
Yoo K et al. (2007) The impact of post-thaw colony-forming units-granulocyte/macrophage on engraftment following unrelated cord blood transplantation in pediatric recipients. Bone Marrow Transplant 39(9):515-21
Prasad V et al. (2008) Unrelated donor umbilical cord blood transplantation for inherited metabolic disorders in 159 pediatric patients from a single center: influence of cellular composition of the graft on transplantation outcomes. Blood 112(7):2979-89
Page et al. (2011) Total colony-forming units are a strong, independent predictor of neutrophil and platelet engraftment after unrelated umbilical cord blood transplantation: a single-center analysis of 435 cord blood transplants. Biol Blood Marrow Tr 17(9):1362-74
遺伝子導入プロトコールの最適化と評価
Hanawa H et al. (2014) Efficient gene transfer into rhesus repopulating hematopoietic stem cells using a simian immunodeficiency virus–based lentiviral vector system. Blood 103(11):4062-9
Aiuti A et al. (2013) Lentiviral hematopoietic stem cell gene therapy in patients with Wiskott-Aldrich syndrome. Science 341(6148):1233151
Biffi A et al. (2013) Lentiviral hematopoietic stem cell gene therapy benefits metachromatic leukodystrophy. Science 341(6148):1233158
LTC-IC（Long-Term Culture-Initiating Cell）アッセイ後のヒトおよびマウス未分化造血前駆細胞の定量
Hogge D et al. (1996) Enhanced detection, maintenance, and differentiation of primitive human hematopoietic cells in cultures containing murine fibroblasts engineered to produce human steel factor, interleukin-3, and granulocyte colony-stimulating factor. Blood 88(10):3765-73
Lemieux M et al. (1995) Characterization and purification of a primitive hematopoietic cell type in adult mouse marrow capable of lymphomyeloid differentiation in long-term marrow "switch" cultures. Blood 86(4):1339-47
Kirouac D et al. (2010) Dynamic interaction networks in a hierarchically organized tissue. Mol Syst Biol 6:417
凍結保存、細胞処理、およびex vivo操作手順の品質管理
Alonso J et al. (2001) A simple and reliable procedure for cord blood banking, processing, and freezing: St Louis and Ohio Cord Blood Bank experiences. Cytotherapy 3(6):429-33
Broxmeyer H et al. (2003) High-efficiency recovery of functional hematopoietic progenitor and stem cells from human cord blood cryopreserved for 15 years.Proc Natl Acad Sci 100(2):645-50
Koliakos G et al. (2007) A novel high-yield volume-reduction method for the cryopreservation of UC blood units. Cytotherapy 9(7):654-9
創薬における候補治療薬に対する造血前駆細胞のin vitro感受性試験
Pessina A et al. (2001) Prevalidation of a model for predicting acute neutropenia by colony forming unit granulocyte/macrophage (CFU-GM) assay. Toxicol In Vitro 15(6):729-40
Pessina A et al. (2003) Application of the CFU-GM assay to predict acute drug-induced neutropenia: an international blind trial to validate a prediction model for the maximum tolerated dose (MTD) of myelosuppressive xenobiotics. Toxicol Sci 75(2):355-67
iPS細胞における造血分化の評価
Vodyanik M et al. (2006) Leukosialin (CD43) defines hematopoietic progenitors in human embryonic stem cell differentiation cultures. Blood 108(6):2095-105
Amabile G et al. (2013) In vivo generation of transplantable human hematopoietic cells from induced pluripotent stem cells. Blood 121(8):1255-64
