製品の特長

StemSpan™-AOFは、ヒト造血細胞の培養と増殖に最適

• ヒト臍帯血由来のCD34陽性細胞を、7日間で20倍に増殖
• 原始的なCD34^brightCD90⁺CD45RA^-細胞集団を培養下で維持
• ゲノム編集プロトコルでの使用に適合
• 組成は動物由来フリー、フェノールレッドフリー
• 関連するcGMPに基づいて製造および試験済み
• 原料の完全なトレーサビリティ
• PMDAの原薬等登録原簿(マスターファイル)に登録済み

データ紹介

図1. StemSpan™-AOFで培養したCD34⁺細胞の免疫表現型

臍帯血からEasySep™ Human Cord Blood CD34 Positive Selection Kit II（ST-17896）で分離したCD34⁺細胞を、StemSpan™ CD34⁺ Expansion Supplement (10X)（ST-02691）とUM171 *を添加したStemSpan™-AOF（ST-100-0130）で7日間培養しました。培養後の細胞を7-AAD、およびCD34、CD90、CD45RAに対する蛍光標識抗体で染色し、FACS解析しました。

CD34とFSCに対するFACSプロット内の水平方向の点線は、CD34発現の蛍光色素マイナス1（FMO）コントロールに基づくCD34^-細胞とCD34⁺細胞の境界を示します。また、オレンジ色枠の領域はCD34^bright細胞の母集団を示します。連続ゲートを使用して、CD34⁺細胞、CD34^bright細胞、およびCD34^brightCD90⁺CD45RA^-細胞の生細胞の割合を示しました。

図2. StemSpan™培地は他の市販培地に比べて、ヒトCD34⁺およびCD34^bright細胞の増殖を促進

臍帯血から分離したCD34⁺細胞をStemSpan™培地（SFEM、SFEM II、ACF、およびXF。オレンジ色のバー）または他社製培地（灰色のバー）で7日間培養しました。すべての培地に、StemSpan™ CD34⁺ Expansion Supplementと175 nMのUM171 *を添加しました。

図1に示すように、培養中のCD34⁺およびCD34^bright生細胞をFACS解析して（A）頻度、および（B）増殖を比較しました。他社製培地と比較して、StemSpan™培地ではCD34⁺およびCD34^bright細胞が有意に高い増殖を示しました。(P < 0.05, one-way ANOVA followed by Dunnett’s post hoc test)。データは平均 ± SEM (n = 8)で示しています。

* 最終濃度が1 μMに調製されたUM729（ST-72332）を使用した場合も、同様の結果が予想されます。UM171とUM729の比較データを含む詳細については、Fares et al. 2014を参照。

注：上図の「StemSpan™-AOF」のデータはフェノールレッド含有の旧製品（StemSpan™-ACF：販売中止）で取得したものです。ただし、StemSpan™-AOF（ST-100-0130）のパフォーマンスも非常に似ていることが確認されています。

図3. StemSpan™培地は他の市販培地に比べて、ヒトCD34^brightCD90⁺CD45RA^-細胞の増殖を促進

臍帯血から分離したCD34⁺細胞を各培地で培養しました。図1に示すように、培養中のCD34⁺ CD90⁺CD45RA^-（実線）およびCD34^brightCD90⁺CD45RA^-（点線）生細胞の（A）頻度および（B）増殖をフローサイトメトリーで分析しました。StemSpan™培地では、CD34^brightCD90⁺CD45RA^-細胞は有意に高い増殖を示しました(P < 0.05, one-way ANOVA followed by Dunnett’s post hoc test)。

図4. StemSpan™培地は他の市販培地に比べて、ゲノム編集後のCD34およびCD45RA^-HSPCの増殖を促進

臍帯血から分離したCD34⁺細胞をStemSpan™培地（オレンジ色のバー）、またはXeno-Freeの他社製培地（灰色のバー）で2日間培養しました。すべての培地にStemSpan™ CD34⁺ Expansion SupplementとUM171を添加しました。次に、ベータ-2-ミクログロブリン（B2M）を標的とするcrRNA：tracrRNAを含むArcitect™ CRISPR-Cas9 RNP複合体を使用して細胞をエレクトロポレーションし、同条件でさらに4日間培養しました。MHC-Iの染色とフローサイトメトリー分析で測定したノックアウト効率はすべての培地で類似しており、約70〜80％でした。（A）CD34⁺細胞と、（B）CD34⁺CD90⁺CD45RA^-細胞の頻度は、エレクトロポレーションから4日後の細胞数をフローサイトメトリーで解析して定量化しました。データは平均+SDで示しています（n = 4ドナー; ** P <0.01）。