ラーニングコーナー
2020/11/04
循環腫瘍細胞(CTC)の分離
- 細胞分離
希少な細胞である循環腫瘍細胞（circulating tumor cell :CTC）をEasySep™やRosetteSep™などの細胞分離プラットフォームを用いて分離することにより、全血やバフィーコート、単核球の処理サンプルからCTCを高い回収率で得ることができます。濃縮されたCTCは未感作(ビーズや抗体などから刺激を受けていない)で、細胞培養や遺伝子解析のためのDNA/RNA分離、マイクロ流体チップでのさらなる精製やその他のアプリケーションにもすぐにご使用いただくことが可能です。
どんなCTC分離キットがご自身のニーズに合っているのかは、単離したい腫瘍細胞のタイプ、それらの細胞が発現する細胞表面マーカー、スタートサンプルの由来などによって決まります。
併せてこちらも（https://www.stemcell.com/technical-resources/methods-library/cell-separation/general-cell-separation-methods/centrifugation/isolation-of-circulating-tumour-cells.html）ご確認ください。
特定の細胞表面マーカーにもとづくCTC分離
目的の腫瘍細胞が発現する細胞表面マーカーが分かっているサンプルからCTCを分離する場合には、不要な造血系細胞をより厳密に除去して高純度の目的細胞を得られる、下記のCTC Enrichment Kit中から適した製品をお選びください。
| 製品名 | サンプルの由来 | CD45陽性細胞除去 | 推奨される実験系 | 商品コード | 処理容量 |
|---|---|---|---|---|---|
| RosetteSep™ CTC Enrichment Cocktail Containing Anti-CD36 |
全血、 バフィーコート |
3.4 - 4.7 log depletion |
次のマーカーを発現する造血系細胞を除去することにより、CTCを濃縮する場合に推奨されます：CD2, CD16, CD19, CD36, CD38, CD45, CD66b 肺小細胞がん（Small cell lung cancer: SCLC）と膵がんに対応しています。 乳がんサンプルへのご使用には適していません（乳がんの小サブセットにおいてCD36が発現していることが示されているため）1,2。 |
ST-15127 ST-15167 |
40 mL 200 mL |
| RosetteSep™ CTC Enrichment Cocktail Containing Anti-CD56 |
全血、 バフィーコート |
3.2 - 4.4 log depletion |
次のマーカーを発現する造血系細胞を除去することにより、CTCを濃縮する場合に推奨されます： CD3, CD14, CD16, CD19, CD38, CD45, CD56, CD61, CD66b 乳癌サンプルに対応しています。 肺小細胞癌（SCLC）、膵癌サンプルでの使用には適していません（肺小細胞癌（Small cell lung cancer: SCLC）と膵癌サンプルにおいてCD56が発現していることが示されているため）3,4,5。 |
ST-15137 ST-15177 |
100 mL 200 mL |
| EasySep™ Direct Human CTC Enrichment Kit |
全血 | 2.8 - 3.2 log depletion |
CTCを直接全血から濃縮する場合に推奨されます。密度勾配遠心分離や沈降、溶血のような前処理の必要はありません。 次のマーカーを発現した造血系細胞を除去することによりCTCを濃縮します（抗CD36抗体および抗CD56抗体は含んでおりません）：CD2, CD14, CD16, CD19, CD45, CD61, CD66b, Glycophorin A 乳癌、肺小細胞癌（SCLC）、膵癌を含めたほとんどのサンプルに対応しています。 |
ST-19657 | 100 mL |
CD45陽性細胞除去によるCTC分離
目的のCTCに発現する細胞表面マーカーが不明の場合には、以下のキットを用いてCD45陽性細胞を除去される事をお勧めいたします。
| 製品名 | サンプルの由来 | CD45陽性細胞除去 | 推奨される実験系 | 商品コード | 処理容量 |
|---|---|---|---|---|---|
| RosetteSep™ Human CD45 Depletion Cocktail |
全血、 バフィーコート |
3.6 log depletion |
新鮮な全血、およびバフィーコートサンプルからCD45陽性細胞を除去することによりCTCを濃縮する場合に推奨されます。 | ST-15122 ST-15162 |
40 mL 100 mL |
| EasySep™ Human Whole Blood CD45 Depletion Kit II |
全血及び 骨髄の単核球 |
4.0 log depletion |
新鮮、または凍結保存されていたヒト単核球サンプルからCD45陽性細胞を除去することによりCTCを濃縮する場合に推奨されます。 | ST-17898 | 2 x 10e9 cells |
参考文献
- Clezardin P et al. (1993) Expression of thrombospondin (TSP1) and its receptors (CD36 and CD51) in normal, hyperplastic, and neoplastic human breast. Cancer Res 53(6): 1421–30.
- Kuemmerle NB et al. (2011) Lipoprotein lipase links dietary fat to solid tumor cell proliferation. Mol Cancer Ther 10(3): 427–36.
- Kontogianni K et al. (2005) CD56: a useful tool for the diagnosis of small cell lung carcinomas on biopsies with extensive crush artefact. J Clin Pathol 58(9): 978–80.
- Naito Y et al. (2006) CD56 (NCAM) expression in pancreatic carcinoma and the surrounding pancreatic tissue. Kurume Med J 53(3–4): 59–62.
- Tiemann K et al. (2006) Solid pseudopapillary neoplasms of the pancreas are associated with FLI-1 expression, but not with EWS/FLI-1 translocation. Mod Pathol 19(11): 1409–13.
細胞分離プラットフォームのご紹介
- RosetteSep™は、ワンステップでヒト全血及びバフィーコートから直接目的の細胞を濃縮できます。サンプル中の不要な細胞を赤血球(RBC)にクロスリンクし、通常の密度勾配遠心分離により除去することでCTCは濃縮されます。
RosetteSep™は細胞分離用チューブSepMate™と併用することで作業時間の節約、高い再現性、効果的かつハイスループットなサンプル処理を実現します。 - EasySep™は、磁気ビーズに結合させた抗体により不要な細胞を認識して除去することでCTCを濃縮する細胞分離試薬です。不要な細胞はEasySep™ magnetにチューブをセットした際に磁力によりチューブ壁面に引き寄せられます。濃縮された目的細胞は、この後（マグネットにサンプルチューブをセットしたまま）新しいチューブに注ぐか、ピペットで移すことで回収されます。
EasySep™キットは、フルオート細胞分離装置 RoboSep™を使用することにより細胞分離を自動化することができます。
弊社の細胞分離製品とCTC分離用製品のさらに詳細な情報については、 https://www.veritastk.co.jp/contact/より弊社へお問い合わせください。
関連製品ラインナップ
細胞分離全般については以下をご参照ください：
STEMCELL Technologies社ウェブサイトへのリンクです：
