FAQ
- 細胞分離
- 用途別細胞培養
- ES/iPS細胞由来CD34細胞の分離方法は？
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EasySep™ Human CD34 Positive Selection Kit II（ST-17856）を使用し、ES/iPS細胞由来のCD34陽性細胞を以下のように分離することができます。
ES /iPS細胞由来の培養細胞用の前処理操作
分化用培地に含まれるEmbryo body (EB)に関して：－
1. 15mlのコニカルチューブ（ST-38009など）にEBを移し、チューブの底に沈殿するのを待ちます
2. 培地を除去しまして、1 mlのACCUTASE™ (ST-07920)を添加し、37℃にて10分程度インキュベートします
3. 1mlピペットマンを使用して15回ほどピペッティングによって攪拌します
4. 10 mlの2% FBS D-PBS (ST-07905)を加えて遠心します。
5. 上清を捨て、推奨バッファー*に細胞ペレットを懸濁します
* 推奨バッファー
EasySep™ Buffer (ST-20144)
RoboSep™ Buffer (ST-20104)
1 mM EDTA ,2％ FBSを含むPBS (Ca2+, Mg2+ free)
操作手順
EasySep™ CD34 Positive Selection Kit II Protocol for ES or iPS CELL CULTURES
EasySep™ (Catalog #18000)マグネット用
1.下記の推奨濃度に細胞を調整する
< 1 x 10^7 cellsの場合は0.1ｍｌの推奨バッファーに希釈
1 x 10^7 - 1 x 10^8 cellsの場合は、1 x 10^8 cells/mLになるように調整する
1 - 5 x 10^8 cellsの場合は、1 ml 容量に調整する
2. 推奨の 5 mL (12 x 75 mm) ポリスチレン製丸底チューブに細胞懸濁液を入れる
3. 100 μL/mLになるように抗体カクテルを添加
4. 軽くタップして攪拌後に、10分間、常温にて静置
5．待ち時間に、RapidSpheres磁気ビーズを30秒以上Voltex
6．静置後にRapidSpheres磁気ビーズを50 μL/mLになるように細胞懸濁液へ添加
7．軽くタップして攪拌後に、5分間、常温にて静置
8．推奨バッファーを2.5ml容量まで添加して、2-3回ピペッティングによって攪拌
9．磁石にポリスチレンチューブをセットして3分間、常温にて静置 （チューブに蓋はしないでください）
10．マグネットとチューブを傾けて、上清をデカンテーションにて捨ててください
11．8-10までの操作を2回繰り返してください（計3回となります）
12．ご目的の培地に分離した細胞（チューブ内に残る）を懸濁してください
もし、細胞の純度などが目的とされるよりも低い場合、11の反復操作をもう一度行っていただくことができます。
しかし、その場合では細胞の回収率が下がる点にご留意ください。
