STEMCELL Technologies ALDEFLUOR ALDEFLUOR Kit

  • 研究用

ALDEFLUOR™試薬システムは、アルデヒドデヒドロゲナーゼ(ALDH)活性に基づいて幹細胞/前駆細胞を同定するための非免疫学的方法です。造血、乳腺、内皮、間葉、神経などのさまざまな系列の正常細胞およびがん前駆細胞で高いALDH発現が報告されています。高レベルのALDHを発現している細胞は、明るく蛍光を発し(ALDHbr)、標準的なフローサイトメーターを使用して同定および計数することができます。あるいは、さらなる精製および特徴付けのためにセルソーターで分離することができます。
幹細胞および前駆細胞を同定、分離するために細胞内部の酵素を使用することで、細胞表面抗原に対する抗体で染色する従来法の代替となります。

2018/05/14 12:00の製品情報

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本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。

製品の特長

Aldefluorの特長

  • ALDH活性が上昇している生細胞を特定します
  • 多種多様な組織における正常および悪性の幹細胞/前駆細胞の特定と分離に使用できます

データ例

Identification of ALDHbr cells from mouse embryonic brain samples

図1. マウス胚の脳サンプル由来 ALDHbr細胞の同定
E14 SVZ細胞をALDEFLUOR™で染色しています。DEABコントロール(A)およびALDH染色(B)のFACSプロファイルを示しています。

Identification of ALDHbr SSC LO cells from human hematopoietic samples

図2. ヒト造血サンプル由来 ALDHbr SSC LO細胞の同定
ALDEFLUOR™で染色された骨髄低密度細胞(A-B)、末梢血単核細胞(C, D)、臍帯血細胞(E, F)。 DEABコントロール(A, C, E)およびALDH染色(B, D, F)のFACSプロファイルを示しています。

Identification of ALDHbr cells from human breast cancer cell lines

図3. ヒト乳がん細胞株由来 ALDHbr細胞の同定
ALDEFLUOR™で45分間染色されたSKBR3乳がん細胞株。DEABコントロール(A)およびALDH染色(B)のFACSプロファイルを示しています。

Identification of ALDHbr Cells from human mammary epithelial samples

図4. ヒト乳腺上皮サンプル由来 ALDHbr細胞の同定
ALDEFLUOR™で染色されたヒト正常初代乳腺上皮。DEABコントロール(A)およびALDH染色(B)のFACSプロファイルを示しています。

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よくある質問

ALDEFLUORで分離した幹細胞でGFPの発現を解析したいのですが、ALDEFLUORの蛍光による干渉は有りますか?

通常ALDEFLUORアッセイの蛍光は細胞外に排出される傾向にありますが、それをALDEFLUOR専用のバッファーと低温で抑えています。従って、バッファーの置換を行い、温度を上昇させることで蛍光の排出を促すことが可能です。ALDEFLUORの蛍光を完全排出させるには、以下の2通りの方法をおすすめしています。

・細胞を液体完全培地中で37℃、24時間インキュベートする。

・細胞を液体完全培地中で37℃、2.5時間インキュベートした後、大量の新しい培地で1回洗う。新しい培地に懸濁し、37℃、1時間さらにインキュベートする。細胞の一部を取り、蛍光が消えているかどうか確認する。もし蛍光が消えていたら、念のため大量の新しい培地で2回洗う。まだ蛍光が残っていたら、インキュベート時間を延長する。

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ALDEFLUORおよびALDEFLOUR Assay Bufferに含まれているABCトランスポーターインヒビターには、どの様な物質が含まれていますか?

ABCトランスポーターインヒビターを含むバッファー組成の詳細は、メーカー非公開の情報となっております。

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ALDEFLUORアッセイを行う際、室温(15 - 25°C)での染色反応はできますか?

はい、可能です。染色時間は室温に依存しますが、反応の完了までの時間はおよそ2 - 4時間が目安となります。

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