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DNA Diagnostic HemaVision HemaVision-15;17

本製品は研究用です。治療および診断目的に使用することはできません。

  • 研究用

HemaVision RT-non Nested PCRシリーズは、multiplex RT-PCR法によって、白血病に関連する各種の染色体転座を検出する試薬です。染色体異常により生じた融合遺伝子を、PCRとゲル電気泳動により、迅速に検出することができます。 本製品はPML-RARA融合遺伝子 t(15;17)(q24;q21)(PML-RARA) および切断点(breakpoint)を検出します。

※本製品はsingle translocationの検出用です。複数転座箇所の解析にはHemaVision-7(DND-HV01-7)をご使用ください。また、より高感度の解析を行いたい場合はHemaVision RT-Nested PCRシリーズのHemaVision-15;17N(DND-HV02-1517N)をご利用ください。

2018/05/14 12:00の製品情報

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本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。

製品の特長

本製品はmultiplex RT-PCR法によって、白血病に関連する染色体転座 t(15;17)(q24;q21)(PML-RARA) および切断点を検出する試薬です。

<HemaVision RT-non Nested PCRシリーズの特長>

  • 高い特異性:標的遺伝子に特異的なプライマーを用いたPCR
  • 低い検出限界:RNA 1 µg中に存在する10-8 µgの 転座RNAを検出可能
  • 逆位の検出が可能:FISH法では困難な変異も検出(inv16)
  • 結果の解釈が容易:PCR産物の電気泳動結果と対応表より転座箇所を特定
  • 正確な実験:内部標準を同時に解析、実験の妥当性を検証可能
  • 迅速:抽出RNAから短時間で結果取得(4-5時間)
  • 簡単な手法:標準的なサーマルサイクラーおよびプロトコルを使用

※特異性のより高い製品をご希望の場合は、HemaVision RT-Nested PCRシリーズをご利用ください。

<検出可能な切断点について>

下記の切断点(融合遺伝子)を検出できます。

<実験ステップについて>

① total RNA抽出

 全血、細胞株、単核球、骨髄細胞などからRNAを抽出します。

② cDNA合成

 製品に含まれているプライマーセットおよびcDNA合成試薬を使って、cDNAを合成します。

③ PCR

 複数のプライマーセットが混合されたプライマーミックスを用いてPCRを行います。

④ 電気泳動

 PCR産物の電気泳動を行います。転座が起きていると、ハウスキーピング遺伝子由来のDNAバンドの他にDNAバンドが観察されます。

<電気泳動のイメージ図>

980 bp付近のバンドは内部標準由来、それ以外は転座箇所由来となります。

・サンプル1では、プライマーミックスA、Bいずれの場合も、980 bp付近にのみバンドが出ています。このため、サンプル1は転座が無いと判断されます。

・サンプル2では、プライマーミックスBを使ったPCRで、980 bp付近のバンドとは別に、490 bp付近にバンドが出ています。このため、サンプル2は転座が有ると判断されます。

⑤ 転座(切断点)判別

 転座箇所由来のDNAバンドの位置(bp)をプロトコルの表と照らし合わせ、転座の同定(切断点含む)を行います。

上記の例の場合、対応表よりサンプル2の転座および切断点は t(15;17)(q24;q21)(PMLex3-RARAex3) となります。

<本製品の構成について>

  • Primer Mix cDNA:cDNA合成用プライマーセットのミックス(1本)
  • Primer Mix PCR:PCR用プライマーセットのミックス(2本)

※PCR用プライマーセットには、転座箇所特異的なプライマーセットおよび、ハウスキーピング遺伝子(内部標準)に特異的なコントロールプライマーセットが含まれています。

別途、以下の試薬が必須となります。

  • Reagents Module with DNA Polymerase (DND-HV06-RMP):cDNA合成に必要な逆転写酵素、PCR酵素、バッファーやdNTPなど

     ※本製品1キットあたり2キット使用します。

  • RNase Free Water:ネガティブコントロール、試薬調製用

以下の試薬は任意です。

  • HemaVision-7 Positive Controls (DND-HV05-7PC):ポジティブコントロールRNA

     ※本製品1キットあたり4キット使用します。

  • cDNA合成前のRNA:ネガティブコントロール

<HemaVision RT-non Nested PCRシリーズと検出する転座について>

詳細は各製品ページをご確認ください。

製品コード 製品名 検出転座
DND-HV03-119 HemaVision-1;19 t(1;19)(TCF3-PBX1)
DND-HV03-411 HemaVision-4;11 t(4;11)(MLL-AFF1)
DND-HV03-821 HemaVision-8;21 t(8;21) (RUNX1-RUNX1T1)
DND-HV03-922 HemaVision-9;22 t(9;22) (BCR-ABL1)
DND-HV03-1221 HemaVision-12;21 t(12;21)(ETV6-RUNX1)
DND-HV02-1517 HemaVision-15;17 t(15;17) (PML-RARA)
DND-HV03-16 HemaVision-inv16 inv16(CBFB-MYH11)
DND-HV01-7 HemaVision-7 上記7種すべて

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