DNA Diagnostic HemaVision HemaVision-Screen
本製品は研究用です。治療および診断目的に使用することはできません。
- 研究用
HemaVision RT-Nested PCRシリーズは、multiplex RT-PCR法によって、白血病に関連する各種の染色体転座を検出する試薬です。染色体異常により生じた融合遺伝子を、Nested PCRとゲル電気泳動により、特異的に検出することができます。
本製品は28種の融合遺伝子を検出します。
※本製品はmulti translocationの検出用です。single translocationの解析には該当遺伝子に対応する製品をご使用ください。また、本製品はHemaVision-28N（DND-HV01-28N）の構成品であるBox1と同一です。さらに切断点の特定を行うには、HemaVision-28NのBox2に含まれている試薬を使用してください。
2018/05/14 12:00の製品情報
本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。
製品の特長
本製品はmultiplex RT-PCR法によって、白血病に関連する28種の染色体転座を検出する試薬です。
＜HemaVision RT-Nested PCR シリーズの特長＞
- 高い特異性：Nested PCRにより目的領域を特異的に増幅
- 低い検出限界：RNA 1 µg中に存在する10-9 µgの 転座RNAを検出可能
- 逆位の検出が可能：FISH法では困難な変異も検出（inv16）
- 結果の解釈が容易：PCR産物の電気泳動結果と対応表より転座箇所を特定
- 正確な実験：内部標準を同時に解析、実験の妥当性を検証可能
- 簡単な手法：標準的なサーマルサイクラーおよびプロトコルを使用
＜検出可能な遺伝子について＞
下記の融合遺伝子を検出できます。
| del1(p32) (STIL-TAL1) | t(1;11) (p32;q23.3) (KMT2A-EPS15) | t(1;11) (q21;q23.3) (KMT2A-MLLT11) | t(1;19) (q23;p13) (TCF3-PBX1) |
| t(3;5) (q25;q34) (NPM1-MLF1) | t(3;21) (q26;q22) (RUNX1-MECOM) | t(4;11) (q21;q23.3) (KMT2A-AFF1) | t(5;12) (q33;p13) (ETV6-PDGFRB) |
| t(5;17) (q35;q21) (NPM1-RARA) | t(6;9) (p23;q34) (DEK-NUP214) | t(6;11) (q27;q23.3) (KMT2A-AFDN) | t(8;21) (q22;q22) (RUNX1-RUNX1T1) |
| t(9;9) (q34;q34) (SET-NUP214) | t(9;11) (p21.3;q23.3) (KMT2A-MLLT3) | t(9;12) (q34;p13) (ETV6-ABL1) | t(9,22) (q34;q11) (BCR-ABL1) |
| t(10;11) (p12;q23.3) (KMT2A-MLLT10) | t(11;17) (q23.3;q21) (KMT2A-MLLT6) | t(11;17) (q23;q21) (ZBTB16-RARA) | t(11;19) (q23.3;p13.1) (KMT2A-ELL) |
| t(11;19) (q23.3;p13.3) (KMT2A-MLLT1) | t(12;21) (p13;q22) (ETV6-RUNX1) | t(12;22) (p13;q11) (ETV6-MN1) | t(15;17) (q24;q21) (PML-RARA) |
| inv(16) (p13;q22) (CBFB-MYH11) | t(16;21) (p11;q22) (FUS-ERG) | t(17;19) (q22;p13) (TCF3-HLF) | t(X;11) (q13;q23.3) (KMT2A-FOXO4) |
＜実験ステップについて＞
① total RNA抽出
全血、細胞株、単核球、骨髄細胞などからRNAを抽出します。
② cDNA合成
製品に含まれているプライマーセットおよびcDNA合成試薬を使って、cDNAを合成します。
③ Master PCR-I
複数のプライマーセットが混合されたプライマーミックスを用いてPCRを行います。
④ Master PCR-II
Master PCR-IのPCR産物および、複数のプライマーセットが混合されたプライマーミックスを用いてPCRを行います。
⑤ 電気泳動
Master PCR-IIのPCR産物の電気泳動を行います。転座が起きていると、ハウスキーピング遺伝子由来のDNAバンドの他にDNAバンドが観察されます。
＜電気泳動のイメージ図＞
910 bp付近のバンドは内部標準由来、それ以外は転座箇所由来となります。
・Master PCR-II後の電気泳動では、プライマーミックスM6を用いたサンプルのみ910 bp付近のバンドとは別にバンドが出ています。このため、このサンプルは転座が有ると判断します。
⑥ 転座（切断点）判別
転座箇所由来のDNAバンドの位置（bp）をプロトコルの表と照らし合わせ、転座の同定を行います。
※さらに詳細な切断点を解析するには、HemaVision-28NのBox2に含まれている試薬を使用してください。
＜本製品の構成について＞
- cDNA Primer Mix：cDNA合成用プライマーミックス（1本）
- Master PCR-I Primer Mix：Master PCR-I用プライマーミックス（8本）
- Master PCR-II Primer Mix：Master PCR-II用プライマーミックス（8本）
※Master PCR用プライマーミックスには、転座箇所特異的なプライマーセットおよび、ハウスキーピング遺伝子（内部標準）に特異的なコントロールプライマーセットが含まれています。
別途、以下の試薬が必須となります。
- Reagents Module with DNA Polymerase (DND-HV06-RMP)：cDNA合成に必要な逆転写酵素、PCR酵素、バッファーやdNTPなど
※本製品1キットあたり3キット使用します。
- RNase free water：ネガティブコントロール、試薬調製用
以下の試薬は任意です。
- HemaVision-7 Positive Controls (DND-HV05-7PC)：ポジティブコントロールRNA
※本製品1キットあたり4キット使用します。
＜HemaVision RT-Nested PCRシリーズと検出する転座について＞
詳細は各製品ページをご確認ください。
| 製品コード | 製品名 | 検出転座 |
| DND-HV02-512N | HemaVision-5;12N | t(5;12)(ETV6-PDGFRB) |
| DND-HV02-821N | HemaVision-8;21N | t(8;21)(RUNX1-RUNX1T1) |
| DND-HV02-922N | HemaVision-9;22N | t(9;22)(BCR-ABL1) |
| DND-HV02-1517N | HemaVision-15;17N | t(15;17)(PML-RARA) |
| DND-HV02-16N | HemaVision-inv16N | inv16(CBFB-MYH11) |
| DND-HV01-28N | HemaVision-28N | 上記を含む28種 |
