DNA Diagnostic HemaVision HemaVision-inv16N
本製品は研究用です。治療および診断目的に使用することはできません。
- 研究用
HemaVision RT-Nested PCRシリーズは、multiplex RT-PCR法によって、白血病に関連する各種の染色体転座を検出する試薬です。染色体異常により生じた融合遺伝子を、Nested PCRとゲル電気泳動により、特異的に検出することができます。
本製品はCBFB-MHY11融合遺伝子 inv(16)(p13;q22)(CBFB-MHY11) および切断点（breakpoint）を検出します。
※本製品はsingle translocationの検出用です。複数転座箇所の解析にはHemaVision-28N（DND-HV01-28N）をご使用ください。また、より簡便な解析を行いたい場合はHemaVision RT-non Nested PCRシリーズのHemaVision-inv16（DND-HV03-16）をご利用ください。
2018/05/14 12:00の製品情報
本製品は研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。
製品の特長
本製品はmultiplex RT-PCR法によって、白血病に関連する染色体転座 inv(16)(p13;q22)(CBFB-MHY11) および切断点を検出する試薬です。
＜HemaVision RT-Nested PCR シリーズの特長＞
- 高い特異性：Nested PCRにより目的領域を特異的に増幅
- 低い検出限界：RNA 1 µg中に存在する10-9 µgの 転座RNAを検出可能
- 逆位の検出が可能：FISH法では困難な変異も検出（inv16）
- 結果の解釈が容易：PCR産物の電気泳動結果と対応表より転座箇所を特定
- 正確な実験：内部標準を同時に解析、実験の妥当性を検証可能
- 簡単な手法：標準的なサーマルサイクラーおよびプロトコルを使用
※より迅速に解析する製品をご希望の場合は、HemaVision RT-non Nested PCRシリーズをご利用ください。
＜検出可能な切断点について＞
下記の切断点（融合遺伝子）を検出できます。
| CBFB ex4 - MYH11 ex30(G) | CBFB ex4 - MYH11 ex29 | CBFB ex5 - MYH11 ex30(D) | CBFB ex5 - MYH11 ex29(E) |
| CBFB ex4 - MYH11 ex34 (F) | CBFB ex5 - MYH11 ex34 (A) | CBFB ex4 - MYH11 ex33 | CBFB ex5 - MYH11 ex33 (B) |
| CBFB ex4 - MYH11 ex32 | CBFB ex5 - MYH11 ex32 | CBFB ex4 - MYH11 ex31 | CBFB ex5 - MYH11 ex31 |
＜実験ステップについて＞
① total RNA抽出
全血、細胞株、単核球、骨髄細胞などからRNAを抽出します。
② cDNA合成
製品に含まれているプライマーセットおよびcDNA合成試薬を使って、cDNAを合成します。
③ 1st PCR
複数のプライマーセットが混合されたプライマーミックスを用いてPCRを行います。
④ Nested PCR
1st PCRの産物、および複数のプライマーセットが混合されたプライマーミックスを用いてNested PCRを行います。
⑤ 電気泳動
PCR産物の電気泳動を行います。転座が起きていると、ハウスキーピング遺伝子由来のDNAバンドの他にDNAバンドが観察されます。
＜電気泳動のイメージ図＞
910 bp付近のバンドは内部標準由来、それ以外は転座箇所由来となります。
・プライマーミックスM6Bでは910 bp付近にのみバンドが出ていますが、プライマーミックスM7Cでは910 bp付近のバンドとは別にバンドが出ています。このため、このサンプルは転座が有ると判断されます。
⑥ 転座（切断点）判別
転座箇所由来のDNAバンドの位置（bp）をプロトコルの表と照らし合わせ、転座の同定（切断点含む）を行います。
＜本製品の構成について＞
- cDNA Primer Mix：cDNA合成用プライマーミックス（1本）
- PCR-I Primer Mix：1st PCR用プライマーミックス（2本）
- PCR-II Primer Mix：Nested PCR用プライマーミックス（2本）
※プライマーミックスには、転座箇所特異的なプライマーセットおよび、ハウスキーピング遺伝子（内部標準）に特異的なコントロールプライマーセットが含まれています。
別途、以下の試薬が必須となります。
- Reagents Module with DNA Polymerase (DND-HV06-RMP)：cDNA合成に必要な逆転写酵素、PCR酵素、バッファーやdNTPなど
※本製品1キットあたり2キット使用します。
- RNase free water：ネガティブコントロール、試薬調製用
＜HemaVision RT-Nested PCRシリーズと検出する転座について＞
詳細は各製品ページをご確認ください。
| 製品コード | 製品名 | 検出転座 |
| DND-HV02-512N | HemaVision-5;12N | t(5;12)(ETV6-PDGFRB) |
| DND-HV02-821N | HemaVision-8;21N | t(8;21)(RUNX1-RUNX1T1) |
| DND-HV02-922N | HemaVision-9;22N | t(9;22)(BCR-ABL1) |
| DND-HV02-1517N | HemaVision-15;17N | t(15;17)(PML-RARA) |
| DND-HV02-16N | HemaVision-inv16N | inv16(CBFB-MYH11) |
| DND-HV01-28N | HemaVision-28N | 上記を含む28種 |
