製品の特長

NRASタンパクは、EGFRの下流でシグナル伝達を担うGTPアーゼで、細胞の増殖、アポトーシス、分化などに影響を与えます。NRAS遺伝子の変異は一部の皮膚黒色腫（メラノーマ）、肺がんや大腸がんで起こり、抗EGFR抗体による薬効に関連するため、変異状態の把握は重要となります。

本製品はADx-ARMS法によって、FFPEサンプルからNRAS遺伝子に存在する16の変異を検出する試薬です。

＜Amoy Diagnostics社Real-time PCR Assayシリーズの特長＞

• 簡便な操作：ワンステップの操作、解析まで含めわずか90分
• 高感度、高い正確性：1%の変異遺伝子まで検出可
• 高信頼性：内部標準も同時検出、ポジティブコントロールもキットに同梱
• 高品質の製品：国際基準ISO13485を取得し、GMPプラントにて製造、管理

＜ADx-ARMS法の原理＞

ADx-ARMS（Amplification Refractory Mutation System）法は、3'末端に変異特異的なプローブを使用し、高感度に変異遺伝子を検出する技術です。 チューブ内で、2ステップの増幅を行います。ステップ1で特異性の高い増幅を、ステップ2で効率良い増幅を行います。

＜本製品で検出可能な変異＞

NRAS遺伝子：Exon2-4に存在する16の変異を検出します。

＜本製品の構成について＞

• NRAS Reaction Mix（7種）：変異遺伝子および内部標準を検出するプライマー、プローブ、dNTPs
• NRAS External Control Reaction Mix（1種）：DNA阻害物質の有無、DNA品質評価用のReaction Mix
• NRAS Enzyme Mix：Taq DNA Polymerase、Uracil-N-Glycosylase
• NRAS Positive Control：プラスミドDNA

＜実験ステップについて＞Bulkタイプの例

① total DNA抽出：サンプルからDNAを抽出します。

※DNA抽出試薬は本製品に含まれておりません。

② DNA濃度調整：1.5-3 ng/µlとなるように1×TE buffer (pH 8.0)でDNA溶液を希釈します。

※推奨DNA濃度はFFPEサンプルの保存期間によって変わります。

③ PCR試薬の調製、分注：NRAS Enzyme Mixと7種のNRAS Reaction Mix、NRAS External Control Reaction Mixをそれぞれ混合し、PCRチューブに分注します。

④ サンプル分注：調整したDNAサンプルおよびネガティブコントロール（水）、キット付属のNRAS Positive Controlを各チューブに加えます。1サンプルあたり8チューブに分注します。

⑤ Real-time PCR：マニュアル記載の条件でReal-time PCRを行います。

⑥ 結果判別：増幅が認められた蛍光の種類と、Ct値を確認します。

FAM標識のPCR産物は変異箇所由来、HEX/VIC標識のPCR産物は内部標準由来となります。

ネガティブコントロール・Positive Control・各サンプルのHEX/VIC標識（内部標準由来）のPCR増幅結果から、実験が妥当であるかを判断します。

次にマニュアル記載の基準に基づき、各チューブのFAM標識の増幅産物のCt値より、変異陽性（strong/weak）か陰性かを判定します。

＜対応するReal-time PCR機器について＞

下記の機器で検証済です。機器によってアダプターが必要になる場合があります。機器により製品コードが異なりますので、お問い合わせください。

• Stratagene：Mx3000P
• ThermoFisher Scientific：ABI 7500
• Roche：LightCycler480（Bulkタイプのみ）
• Bio-Rad：CFX96（Bulkタイプのみ）
• Qiagen：Rotor-Gene Q/6000（Bulkタイプのみ）

＜Real-time PCR Assayシリーズで検出可能な変異遺伝子＞

がんのシグナル経路に関わる下記遺伝子が検出可能です。 各遺伝子の検出に対応するキットをご利用ください。