研究者紹介

松本　さおり先生 大阪大学　ヒューマン・メタバース疾患研究拠点 研究室のホームページ ※ 所属や役職等は掲載当時のものです

研究背景

WPIプロジェクト「ヒューマン・メタバース疾患研究拠点」において、私が所属するiPSCコアファシリティ（責任者：中川誠人特任准教授（常勤））では、拠点内のラボと連携して患者由来iPS細胞を作製することがミッションの１つである。患者血液を受け取り、末梢血単核細胞（以下 PBMC）を分離し、PBMCからiPS細胞を樹立している。

RoboSep-S 導入の理由

実験者の安全を守るため、血液提供者の病原体検査を事前に実施し結果を確認した上で本業務を実施しているが、血液曝露リスクをできる限り低くするという点も重要である。

ヒト全血からPBMC分離までの工程を、RoboSep-Sを用いて自動分離することにより、従来活用していた密度勾配媒体を用いた比重遠心分離法による手作業よりも、血液サンプルに接触する操作を最小限にすることが可能となった。血液曝露リスクが低減されるという点、また作業効率の向上、人の手による作業のばらつきやヒューマンエラー回避の観点から我々はRoboSep-Sを採用した。

使用して感じたメリット

密度勾配媒体を用いた手動式専用チューブSepMate-50に対して、RoboSep-Sを用いたEasySep技術をベースにした免疫磁気ビーズ分離は、最初にサンプルと試薬類をセットするだけで抗体の結合から磁気分離までの全行程を完全に自動で行える。そのためRoboSep-S ではhands-on timeは約5分、SepMate-50では約20分程度であり、さらに凍結までの全工程の中で必要な遠心回数は、RoboSep-Sでは1回、SepMate-50では3回必要であり、総処理時間はRoboSep-SではSepMate-50よりも30分から血液量によっては50分短縮できた。

また、SepMate-50で必要なデカンテーションの手動ステップがRoboSep-Sでは必要ないため、血液曝露リスクが大幅に低減できる。現在使用しているRoboSep-Sは、安全キャビネット内で動かすことが可能なコンパクトなサイズとなっており、さらに１セットあたり7 mLまで、４セット同時処理することが可能で（最大処理量は検証済み）、安全かつ大量に自動処理を行える。

実際の成果

実際に同一ドナー由来の全血を二分してRoboSep-SとSepMate™-50でPBMCを分離した際の、全血1 mL当たりのPBMC収量および生存率を図1に示す（n=1）。本検討では、PBMC収量および生存率は両手法で大きな差は認められなかった。一方、RoboSep-Sではhands-on time、遠心回数およびデカンテーション操作を削減でき、作業効率と安全性の向上が得られた。

RoboSep-Sを用いてPBMCを分離し、iPS細胞樹立を行った結果を図２に示す。iPS細胞様コロニーが観察され、未分化マーカーであるTRA-1-60の発現が確認できていることがわかる。2024年11月から2026年7月の期間において、RoboSep-Sで分離したPBMCから23株のiPS細胞を樹立している。

RoboSep-Sは、SepMate-50と同程度のPBMC収量・生存率を維持しながら、hands-on time、遠心操作、血液への接触機会を削減し、患者由来iPS細胞樹立の標準化と省力化に有用であった。

今後の展望

PBMC分離の品質がその後のiPS細胞樹立の成否を左右する重要工程であり、RoboSep-Sで分離したPBMCからのiPS細胞樹立は良好な結果が得られており、引き続き現状の手法を患者由来iPS細胞樹立の標準ワークフローとして運用し、再現性の高いiPS細胞製造を目指したい。

ご利用いただいた製品

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