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2019/08/30

【Dynabeads】Exosome(エキソソーム・エクソソーム)サブセットを検出・単離

  • タンパク・核酸発現解析

Dynabeads Exosome Isolation/Detection Reagentシリーズは再現性、安定性で定評のあるDynabeads(ダイナビーズ)を用いたExosomeサブセット単離用試薬です。 最近の研究により、Exosome/ECVはいくつかのサブセットからなり、それぞれが異なる機能を持つことが示唆されています。 Exosome(エキソソーム・エクソソーム)のような細胞外小胞体(extracellular vesicles:ECVs)を表面に存在するマーカータンパク質をターゲットとして選択的に免疫磁性分離することができます。

Dynabeadsを用いたExosome(エキソソーム・エクソソーム)サブセットの検出・単離

Extracellular Vehicle(細胞外小胞: EV) は、細胞から分泌される脂質に囲まれた小胞であり、そのうち直径30~120 nmほどの小さなEVがExosome(エクソソーム・エキソソーム)と呼ばれ、近年生体内での機能の解明に関わる研究が進んでいます。

現行ではexosome抽出法の“Gold Standard”として超遠心を用いた手法が広く利用されています。ただし、この場合、性状・濃度が類似した他粒子(エンドソーム等)や、IgMなどの高質量のタンパク質も含まれるサンプルではexosomeだけを回収することが難しいと云われています。近年ではTotal exosomeを回収する試薬も開発されています。

Dynabeads Exosome Isolation/Detection Reagentシリーズはexosomeの表面に発現するテトラスパニンファミリー(CD9、CD63、CD81)を利用した免疫沈降法によって特定のサブセットを高純度で回収することができます。
エキソソーム膜表面に存在するタンパク質についてはさまざまな報告がありますが、特にテトラスパニンファミリーのCD9、CD63、CD81は、発現量が多く、エキソソームマーカー候補として既に利用されています。

単離されたExosomeサブセットは内包するタンパク質やRNAなどの解析に用いることができます。

Dynabeads Exosome Workflow 1.jpg

また、Dynabeads ExosomeとKingFisher System(ThermoFIsher SCIENTIFIC社)と組み合わせて自動化にも対応しています。

詳しくはこちらのAPPLICATION NOTEをご参照ください。

Dynabeadsを用いたExosomeの検出

Dynabeads Exosome FCM analysis.jpg

単独の遊離エキソソームは、あまりにも小さいため、ほとんどのフローサイトメトリー機器では検出できません。Dynabead Exosomeを用いることにより、エキソソームは、ビーズ表面に結合している間にフローサイトメトリーで簡単に視覚化できます。
2.7μm Dynabeadsを使用すれば、明快かつ明確なフロー分析が可能となります。

Dynbeads Exosome compared.jpg

細胞によって産生されるエキソソームを識別することができます。特定のエキソソームを選択できるため、よりエキソソームの特性にフォーカスした研究に適しています。

Dynabeadsを用いたExosomeの単離

Dynabeads Exosome WB.jpg

Dynabeads Exosome WB Compared.jpg

Exosomeの含有量が高いサンプルであれば、予備濃縮しなくてもDynabeadsを用いることで直接Exosomeを検出・単離が可能!!

Dynabeads Exosome Workflow 2.jpg

Dynabeads Exosome Direct Compared.jpg

Dynabeads Exosome Isolation/Detection Reagentシリーズ

単独の遊離エキソソームは、あまりにも小さいため、ほとんどのフローサイトメトリー機器では検出できません。Dynabead Exosomeを用いることにより、エキソソームは、ビーズ表面に結合している間にフローサイトメトリーで簡単に視覚化できます。
2.7µm Dynabeadsを使用すれば、明快かつ明確なフロー分析が可能となります。



エキソソームの単離と検出は、これまで手間のかかる困難な作業を伴う非特異的なものでした。Dynabeads Exosomeは、実績のある Dynabeadsを使用してあらかじめ濃縮されたテトラスパニンファミリー陽性エキソソームをエキソソームサンプルから簡単に単離し、精製したエキソソームをフローサイトメトリーや電子顕微鏡、ウェスタン ブロットなどの技術で検出できるようにします

また、がん診断研究で注目されているEpCAM(epithelial cell adhesion molecule)陽性のエキソソームを検出・回収できるDynabeads Exosomeもあります。

Dynabeadsは、磁性ビーズ自体が着色されているため、実験操作中にサンプルを視認することができます。サンプルチューブをマグネットにセットすることで、ビーズに結合したexosome/ECVsをチューブ壁面に回収し、単離やバッファー交換を簡単に行うことが可能です。また、スタートサンプル量や以後のアプリケーションに応じて、サンプルおよびビーズの量は容易にスケールを調節することができます。

Dynabeads-Exosome.jpg

参考論文

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