FAQ
- 移植・HLA・MHC
- マイクロSSPでバンドが薄く、判定に困るケースではどのように対応したら良いでしょうか？
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マイクロSSPでバンドが薄くなる原因は、DNAの増幅不良、PCR時の蒸発などが考えられます。 以下の点にご注ください。
1．DNA
DNAの推奨純度OD260/OD280＝1.65-1.80、濃度は100 ng/μL (25-200 ng/μL)です。DNAの濃度が薄すぎる・濃すぎる、不純物が含まれているとPCRによる増幅が上手くいかず、バンドが薄く見えるケースがございます。
2．Taq DNAポリメラーゼ
One Lambdaで検証したTaq DNAポリメラーゼ をお使いください。
推奨：AmpliTaq DNA Polymerase（Thermo Fisher Scientific社: #N8080160、N8080171）
3．サーマルサイクラー
推奨品のApplied Biosystems Veriti Thermal Cycler（Thermo Fisher Scientific社）の9600モードをお使いでしょうか。通常のPCRと異なり、HLAの増幅では温度変化のスピードも重要です。推奨品、あるいはそれと同等の設定をしたサーマルサイクラーをご使用ください。
4．消耗品
吸着シールのズレによる蒸発などが起こるケースがございます。製品に付属のシールと、PCR用パッド（製品コード：SSPPADTN）をご使用ください。より蒸発を防ぐのであれば、LABType製品で推奨の熱吸着シール（Thermo Scientific Adhesive PCR Plate Seals、Thermo Fisher Scientific社: #AB0558）をお使いいただいても構いません。
5．その他
D-mixはチューブ内に1000 uL以上入っている可能性がございます。直接チューブにDNAを入れず、一度別のチューブに取り分けるなどして、きちんと1000 uL取り分けるようにして下さい。