FAQ
- 細胞分離
- EasySepでT細胞やB細胞を分離する際に、血小板が混入してしまう場合の原因と対策にはどういうことがありますか？
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血小板は巨核球から得られた小さくイレギュラーな形をしている細胞です。一度活性化されると、簡単に他の種類の細胞に接着し細胞凝集塊を形成します。
従って、血小板を含む血液サンプルは優しく扱い、活性化させない様に注意する必要があります。
●採血時の注意点
1. 採血時にWide bore needle（19G）を使用します。
シリンジプランジャーを使う場合は、激しい摩擦が加わらないようにしてください。
2. 採血時により多くの抗凝固剤を使用してください。
3. 全血サンプルはボルテックスしないでください。
4. Ca2+、Mg2+が入っていないバッファーを使用してください。入っていると血小板が活性化してしまいます。
●分離操作時の注意点
1. 単核球を比重分離する際は、血小板濃縮層を取らないように注意してください。
2. 単離した単核球を洗浄する際は、スロースピンウォッシュを最低3回実施してください。
スロースピンウォッシュの方法は下記を参照してください。
1)120xg、10分、ブレーキオフ、室温で遠心します。
2)慎重に血小板が含まれる上清を除去します。
3)細胞ペレットを新しいバッファーに移し懸濁します。（移す際は新しいピペットを使用）
参考文献 1 Lim K. G. and Weller, P. F. 2001. Isolation of Human Eosinophils. Current Protocols in Immunology. 7.31.1-7.31.7.