FAQ

移植・HLA・MHC

LABScreenに使用するサンプルの前処理方法には何がありますか？
One Lambda社ではサンプルの凍結融解・超遠心を必須としており、非特異反応が見られた場合にはAdsorb Outによる吸収操作をお勧めしています。
その他、EDTA処理、DTT処理やFBS処理などがありますので参考にしてください。

1.　凍結融解、超遠心（必須）
イムノコンプレックスを除去します。10,000 xg で10分以上遠心を行ってください。

2.　Adsorb Out処理(推奨)
ラテックスビーズに対する非特異的反応の影響を除去できます。NCビーズ値が高い場合に使用します。血清30 µLに対してAdsorb Outビーズ3 µLを加え、室温で30分インキュベート後、10,000 xgで5分遠心します。

3. EDTA処理(推奨)
補体活性に必要なCa2+とキレートを形成することで、補体によるプロゾーン現象の影響を除去できます。
使用する試薬：0.5M-EDTA（メーカー不問）
溶解した血清90 µLに対しEDTAを2 µL入れます。室温にて10分間、振とうしながら反応させ、20,000 xgで10分遠心し上清を使用します。

4. DTT処理（参考）
IgM等による影響を除去することができます。ASHIでは以下のプロトコルを推奨しています。
0.05M DTT溶液 10 µLに対して血清を90 µL加えます（DTTの終濃度は0.005M）。しっかり混ぜた後、37℃で30-45分インキュベートします。

5. FBS処理（参考）
バックグラウンドが抑えられる場合があります。
血清100 µLに対して FBSを3 µLを加え、37℃で20-30分インキュベートし、10,000xgで5分遠心します。