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「IntestiCult」7日以内で! 3次元モデルのヒト腸管オルガノイド形成・維持用培地

[ 2017-09-29 ]

Matrigel®に基づく3D培養技術を用いてin vitroで「ミニ」臓器(脳、肝臓、胃、心臓、腎臓など)と言われるオルガノイドが作成され、疾患プロセスのin vitroモデリングおよび薬物試験等、広範囲の用途に利用されています。最近、in vitroで作成した肝臓および小腸オルガノイドのマウスへの移植が成功したことから、「ミニ」臓器は生体内でも正常に機能することが示唆されました。腸管オルガノイドは、腸上皮の発生と機能の研究、腸疾患モデル、標的低分子スクリーニング、さらには腸管上皮幹細胞の特性や、再生医療の研究など、様々なアプリケーションにご利用いただけます。

 

腸管オルガノイド(イメージ)3D腸管オルガノイドのメリットとは?

  • 2D培養より体内の複雑な微小構造および機能を模倣できる
  • 動物モデルより、コストを削減し、時間を短縮できる
  • 共培養(腸内細菌、他の組織)でin vivoの複雑な相互作用の研究モデルができる

 

IntestiCult™ 培地の特長

短時間:安定して継代可能な腸管オルガノイドを形成、7日以内 

コンプリートキット:サイトカイン・成長因子の添加不要、

EASY-TO-USE簡易なin vitro 培養系、最適化されたシンプルなプロトコル

得られたオルガノイドは:Forskolin Swelling Assay*で機能的な評価が可能

*嚢胞性線維症(CFTR)機能を評価するため、腸オルガノイドのフォルスコリン誘発腫脹の定量アッセイです。

 

 

STEMCELL Technologies社の新製品IntestiCultTM培地を用いると、3D腸管オルガノイドが、7日間で得られます。
IntestiCultTM Organoid Growth Medium (Human) (商品コード:ST-06010) は、ヒト腸陰窩 (intestinal crypts) に由来する腸オルガノイドを効率よく形成し、長期培養するための完全培地です。 腸管オルガノイドは幹細胞ニッチ環境のような細胞培養条件で培養できます。LGR5+ 腸管幹細胞の速い増殖や、ヒト腸管オルガノイドの効率的な継代培養が可能です。

 

 

効率的なオルガノイド成長

効率的なオルガノイド成長(1)

Fig. 1 IntestiCult™ Organoid Growth Medium (Human) ST-06010を用いて、ヒト結腸生検サンプルから分離した初代オルガノイドを増殖培養させた画像(A~D)。オルガノイド複数継代後の成長率(E)初代P1:48.8 ± 4.5%;P2:85.4 ± 1.4%;P3:96.5 ± 3.9% (n=3-4) 。

 

 

腸管上皮マーカーのタンパク質の局在化 

腸管上皮マーカーのタンパク質の局在化

Fig. 2 IntestiCult™ Organoid Growth Medium(Human) ST-06010を用いて培養したオルガノイドの上皮層には、活発に増殖する前駆細胞(Ki67+)が存在する(免疫染色像)。

 

 

 

Forskolin Swelling Assayで機能的な評価が可能 

Forskolin Swelling Assayによる腸管オルガノイドの機能的評価

Fig. 3 ヒト腸オルガノイドを(A)5 μMフォルスコリンまたは(B)DMSOで処置し、オルガノイド面積を0分および120分で測定した。(C)フォルスコリン処理オルガノイドの面積は、DMSO処置オルガノイド(7.5 ± 0.8 %)と比べて増加(33.5 ± 3.8 %, n=3)した。

 

 

 

【関連リンク】

 

 

【製品リスト】

商品コード

商品名

梱包単位

ST-06010

IntestiCult Organoid Growth Medium (Human)

kit

ST-36254

DMEM/F-12 with 15 mM HEPES

500mL

ST-37350

D-PBS without Ca++ & Mg++

500mL

ST-07174

Gentle Cell Dissociation Reagent

100mL

ST-72302

Y-27632 (2HCl)

1mg

※ 他にCorning® Matrigel®などが必要になります。詳細はマニュアルをご覧ください。