FAQ
- 細胞分離
- Dynabeadsを用いてヒト血液MNCから細胞分離を行う際に血小板の持ち込みをできるだけ防ぐMNC回収プロトコールは有りますか？
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血小板の持ち込みをできるだけ防ぐMNC回収プロトコールを下記に示します。その際には、PBS / 0.1% BSA / 0.6% クエン酸ナトリウム溶液をご用意ください。
Dynabeadsを使ったヒト細胞のネガティブ分離には共通のプロトコールです。
1. Dilute 10 ml of buffy coat with 25 ml PBS / 0.1% BSA / 0.6% Na citrate at room temperature.
2. Add the diluted buffy coat on top of 15 ml of Lymphoprep.
3. Centrifuge at 160 g for 20 minutes at 20°C.
4. Remove 20 ml of supernatant by suction to eliminate platelets.
5. Centrifuge at 350 g for 20 minutes at 20°C.
6. Recover MNC from the plasma/Lymphoprep interface and transfer the cells to a 50 ml tube.
7. Wash MNC three times with PBS / 0.1% BSA / 0.6% Na citrate by centrifugation at 225 g for 8 minutes at 2-8°C and resuspend the MNC at 1 x 10^7 MNC per 100-200 ml PBS / 0.1% BSA / 0.6% Na citrate.
