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【製品概要】

STEMCELL Technologies社の新しいHuman Treg Isolationキットは、短時間で全血またはPBMCから直接、高純度の制御性T細胞(Treg)を分離することが可能です。CD25、CD127、およびCD49dの発現をもとにTregポピュレーションを分離します。分離された細胞は、機能を維持し、ダウンストリームのTregのアッセイにすぐに使用可能です。

【迅速】

• 分離時間の節約
• 全血、バフィーコート、白血球アフェレーシスサンプルから直接細胞分離が可能

【コスト効率】

• 高価なカラムは不要
• セルソーターの分離時間を短縮
• キットは2年間安定

【多用途】

• Tregの異なるサブタイプを分離
• ダウンストリームアプリケーションまたはスタートサンプルに応じた最適なキットを選択可能
• お好みのTregを得る為のカスタムオーダーが可能

■細胞分離時間の短縮

TABLE 1: STEMCELL社 と他社製品のTreg分離キットの分離プロトコールの比較

■分離したTregの機能解析

Real-time(RT)-PCR解析では、精製したCD4+CD25+ T 細胞フラクションにおけるFoxP3 mRNAレベルが、CD4+CD25neg T 細胞フラクションと比較して89倍高いという結果を示しています。

FIGURE 1. 分離したCD4陽性T細胞集団におけるFoxP3の測定

分離したCD4+CD25high T細胞の抑制活性は、IL-2非存在下、CD3/CD28抗体結合ビーズで刺激したときのCD4+CD25negの増殖応答に対する影響を測定することによって評価しています(Figure 2)。精製したCD4+CD25high T細胞をCD4+CD25negT細胞と1:1で混ぜたとき、CD4+CD25negT細胞の増殖応答はほぼ完全に抑制され、割合が1:10のときにも増殖抑制が検出できました。

FIGURE 2. 分離したCD4+CD25high T細胞はアナジー状態であり、CD4+CD25negT細胞の増殖を抑制

■CD4+CD25high T細胞分離キットの使用例

• 活性化および増殖^1,2,3,4
• 同種混合リンパ球反応(MLR)の抑制^1,5
• 樹状細胞との共培養^2,5,6
• 細胞移植^4,7
• RNAの抽出^3,8
• 遺伝子発現プロファイル⁸
• RT-PCR解析^5,8
• クロマチン免疫沈降-DNAマイクロアレイ(ChIP-chip)⁸

【参考文献】

1.Wang X-N, Haniffa MA, Holtick U, et al. Regulatory T-Cell Suppression of CD8 T-Cell-Mediated Graft-Versus-Host Reaction Requires Their Presence During Priming.Transplantation. 88(2): 188-197.
2.Nguyen KD, Vanichsarn C, and Nadeau KC. Impaired IL-10–dependent Induction of Tolerogenic Dendritic Cells by CD4+CD25hiCD127lo/– Natural Regulatory T Cells in Human Allergic Asthma. J Respir And Crit Care Med. 2009; 180: 823-833.
3.Venken K, Hellings N, Broekmans T et al. Natural Naîve CD4+CD25+CD127low Regulatory T Cell (Treg) Development and Function Are Disturbed in Multiple Sclerosis Patients: Recovery of Memory Treg Homeostasis during Disease Progression. J Immunol 2008; 180: 6411-6420.
4.Trzonkowski P, Bieniaszewska M, Juciska et al. First-in-man clinical results of the treatment of patients with graft versus host disease with human ex vivo expanded CD4+CD25+CD127- T regulatory cells. Clinical Immunology. 2009; 133(1): 22-26.
5.Shalev I, Liu H, Koscik C, et al. Targeted Deletion of fgl2 Leads to Impaired Regulatory T Cell Activity and Development of Autoimmune Glomerulonephritis. J Immunol 2008; 180: 249-260.
6.Muthuswamy R, Urban J, Lee J, Reinhart TA, Bartlett D, and Kalinski P. Ability of Mature Dendritic Cells to Interact with Regulatory T Cells Is Imprinted during Maturation. Cancer Res. 2008: 68(14): 5972-5978.
7.Richer MJ, Straka N, Fang D, Shanina I and Horwitz MS. Regulatory T-Cells Protect From Type 1 Diabetes After Induction by Coxsackievirus Infection in the Context of Transforming Growth Factor. Diabetes. 2008; 57(5): 1302-1311.
8.Liu w, Putnam AL, Xu-yu Z, et al. CD127 expression inversely correlates with FoxP3 and suppressive function of human CD4+ T reg cells. J Exp Med 2006; 203 (7): 1701-1711.

【技術資料】

制御性T細胞の為の細胞分離製品

【関連資料】

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【製品リスト】

■細胞分離キット

■プレ濃縮キット