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ヒト単球から効率的に成熟樹状細胞(mDC)を! - STEMCELL Technologies社

[ 2017-08-28 ]

樹状細胞(DC)は、最も強力な抗原提示細胞で、免疫応答の重要な調節因子です。癌免疫療法、樹状細胞ワクチンや、感染症に対する治療および予防研究で非常に関心が高い細胞です。

STEMCELL Technologies社は、単球の分離から未熟樹状細胞(iDC)への分化および成熟(mDC)までサポートする製品を提供しています。

 

●  樹状細胞研究の基本ワークフローと関連製品

 

→ 単球分離から成熟樹状細胞まで、1週間

→ 得られたmDC:機能を持つT細胞増殖能あり炎症性サイトカインIL12を産生!

 

 

 

 

 単球の分離

 

●  EasySep Human Monocyte Isolation Kit (ST-19359) を用いたヒト単球の分離

新鮮/凍結保存PBMCあるいはアフェレーシスサンプルから、単球を最短12.5分でネガティブ分離するキットです。また、キット中の Platelet removal cocktailを使用することで血小板の混入を10分の1に減らすことができます。カラムを使用しないため、細胞へのダメージは最小です。

EasySep プロトコル イメージ

Fig. 1 EasySep単球細胞の分離プロトコル


Fig. 2 EasySep Human Monocyte Isolation Kit (ST-19359)を用いて、12.5分でネガティブセレクションで回収したヒト末梢血由来単球細胞

 

 

 DCへの分化、成熟 

 

●  樹状細胞への分化、成熟の流れ

ヒトDCへの分化成熟 概略

ImmunoCult-ACF Dendritic Cell Medium(ST-10987)およびサプリメント(ST-10988、ST-10989)を用いて、単球細胞から未成熟DC(iDC)への分化、成熟DC(mDC)を生成することができます。


●  なぜDCsの生成に、 ImmunoCultを用いるのか?

成分が明らか無血清で動物成分不含有

簡便Ready-to-useでDCの分化と成熟をサポートする最適化された組成

信頼ある結果希望のフェノタイプと機能を持つ成熟DCを高収率で回収

フレキシブル培地とサプリメントを別々あるいは一緒に使用可能

 

●  単球から未成熟DCへの分化

EasySepあるいはRosetteSepで分離した単球細胞(1 x 106 cells/mL)は、ImmunoCult-ACF Dendritic Cell Differentiation Supplement(ST-10988)を添加したImmunoCult-ACF Dendritic Cell Medium(ST-10987)で培養することで、未成熟DCへ分化可能です。

 

●  DCの成熟

ImmunoCult Dendritic Cell Maturation Supplement(ST-10989)を添加したImmunoCult-ACF Dendritic Cell Medium(ST-10987)で未成熟DC(iDC)を培養することで、成熟DC(mDC)を得ることができます。

Fig.3 ImmunoCultで得られたiDCおよびmDCのイメージ

 

DCの成熟効率

Fig. 4  成熟DCの表現型(A)培養7日目のCD14とCD83発現をフローサイトメトリーで解析したところ、93 ± 5%が成熟DCマーカーのCD83を発現していた。1 ± 1%のみ単球マーカーCD14を発現していた(mean ± SD, n=39)。 成熟DCの回収率は、0日目の生存単球数に対する7日目の生存細胞数の割合で、45 ± 25%であった(mean ± SD, n=39)。(B)培養5日目からMaturation supplementを加えた場合(Mature DC)と加えなかった場合(Immature DC)で、7日目における培養上清中のIL-12p70濃度をELISAで測定した。それぞれ361 ± 81、5 ± 2 pg/mLであった(mean ± SEM, n=27)。

 


 解析

 

●  ImmunoCultで成熟したDC表現型の評価

ImmunoCultで成熟したDCの評価
Fig. 5 サプリメントを加えたImmunoCult-ACF Dendritic Cell
Medium で培養成熟させた DCは適切なフェノタイプを示す

Fig. 6 ImmunoCultで培養5日後、成熟サプリメントを加えて2日培養、成熟させた DCの培養上清にはIL-12 p70が分泌されている


● T細胞の活性化及び増殖からみる成熟DCの機能

ImmunoCult-ACF Dendritic Cell MediumとImmunoCult Dendritic Cell Maturation Supplement (Catalog #ST-10989)を加えて培養、成熟させた DCは T 細胞増殖能を示します。

Fig.7A)CFSEアッセイヒストグラム (B)分裂するT細胞の数(mean ± SEM, n=4)。EasySepで分離したCD8+ T細胞(1×105 cells)をそれぞれの条件で培養した結果。
各左より
Negative: ImmunoCult T cell expansion培地のみ、Immature DC: ペプチド抗原存下、未成熟DCCD8+ T 細胞(1:4)で共培養、Mature DC: ペプチド抗原存下、成熟DCCD8+ T 細胞(1:10)で共培養、Positive: ImmunoCult human CD3/CD28 T cell Activatorで培養。

 

 

【関連リンク】

 

 

【製品リスト】

商品コード

商品名

梱包単位

ST-19359

EasySep Human Monocyte Isolation Kit

1x10^9 cells用

ST-15028

RosetteSep-human Monocyte Cell

2 mL (全血40 mL用)

ST-15068

RosetteSep-human Monocyte Cell

10 mL (全血200 mL用)

ST-86450

SepMate-50 100-Pack RUO

100本入

ST-86460

SepMate-50 500-Pack RUO

500本入

ST-10985

ImmunoCult Dendritic Cell Culture Kit

kit

ST-10986

ImmunoCult ACF Dendritic Cell Medium

500 mL

ST-10987

ImmunoCult ACF Dendritic Cell Medium

100 mL

ST-10988

ImmunoCult ACF Dendritic Cell Differentiation Supplement

1 mL

ST-10989

ImmunoCult Dendritic Cell Maturation Supplement

0.5 mL

ST-60004

Anti-Human CD14, M5E2

100 ug

ST-60018

Anti-Human CD45, HI30

100 ug

ST-60083

Anti-Human CD22, HIB22, 100ug

100 ug