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CAR(キメラ抗原受容体)-T細胞の単離・活性化・増殖

[ 2017-08-02 ]

CAR (キメラ抗原受容体) -T細胞の単離・活性化・増殖

T細胞療法:「―ベンチからベッドサイドまで―」

 

CAR-T細胞治療

CAR-Tの細胞治療法は、がん患者からT細胞を分離し、遺伝子工学技術を用いて、T細胞にキメラ抗原受容体(機能:腫瘍細胞の認識、T細胞の活性化、腫瘍細胞を破壊する)を付和した、CAR-T細胞をin vitroで増殖したCAR-T細胞を患者自身の体に戻すという治療法です。

 

CAR-T細胞治療の特徴:

  • 患者自身のT細胞を使用するので、拒否反応のリスクを減らすことができます。
  • 多くの腫瘍細胞は、同一の抗原を発現するため、一つ腫瘍抗原に対するキメラ抗原受容体を構成すれば、他の腫瘍に対する治療も可能です。
  • CAR-T細胞は、腫瘍細胞の蛋白質抗原や非蛋白質の糖脂類抗原も認識できるので、腫瘍抗原のターゲット範囲を広げることができます。
  • CAR-T細胞は、MHCに拘束性を示しません。
  • CAR-T細胞は、免疫記憶機能がありますので、患者の体内に戻しても長期間で機能を示します。
  • 自殺遺伝子をT細胞に組み込む事で、CAR-T細胞の安全性を向上させることができます。

 

STEMCELL Technologies社は、GEヘルスケア社と共同し、cGMPグレードのT細胞試薬を用いてクリニックへの応用を目指しています。
現在、米国薬局方USP1043(細胞療法等の製品製造時に選択すべき試薬等の基準)に則って試薬の開発を進めています。
今後STEMCELL Technologies社はGEヘルスケア社にライセンシングしたcGMP-grade T細胞製品を製造予定です。

 

CAR-T 細胞を生成するワークフロー  

CAR-T 細胞を生成するワークフロー

STEMCELL Technologies社の細胞治療研究用製品を使用する理由
DOCUMENTATION CoAとCoOを含めたトレーサビリティーを提供
CONSISTENCY 安定した品質
QUALITY 豊富なQCテスト
CONSULTATION 経験豊富なグローバルな専門家がサポート

 


CAR-T研究をサポートする研究用試薬をご紹介します。

 

EasySep Release Human CD3 Positive Selection Kit (ST-17751)  NEW!!

ポジティブ分離した細胞から、非酵素処理でビーズを外せる製品です。
処理時間は約30分と非常に素早く分離できます。
血液からの分離に加え、同一試料から複数種類の細胞分離、シーケンシャル分離による希少な細胞または複雑なフェノタイプの細胞分離、組織からの細胞分離にも有用です。

EasySep Release Human CD3 Positive Selection Kit 純度
Fig.1 CD3ポジティブ分離キット:99.4 - 99.8%

使用方法: 

1. EasySep Release抗体カクテルを加え、3分インキュベート
2. EasySep Release Rapidsphereを加え、3分インキュベート
3. マグネットにセットし、5分静置した後、上清を捨てる。その後2回洗浄する
4. EasySep Release Bufferを加え、3分インキュベート、リリース効率は70-90 %
5. マグネットにセットし5分静置した後、上清(ビーズフリーの細胞)を回収する

 

 

ImmunoCult Human CD3/CD28 T Cell Activator(ST-10971)

ImmunoCult Human CD3/CD28/CD2 T Cell Activator(ST-10970)

単離されたヒトT細胞を活性化および増殖させるサプリメントです。
STEMCELL Technologies社の独自技術であるTetrameric antibody complex構造をとった抗ヒトCD3抗体、抗ヒトCD28抗体および抗ヒトCD2抗体により各細胞表面リガンドがクロスリンクしやすくなり、効率良くヒトT細胞を活性化・増殖します。

Fig.2 ImmunoCult Human CD3/CD28 T Cell Activator あるいは ImmunoCult™ Human CD3/CD28/CD2 T Cell Activatorで活性化したT 細胞(培養3日)

Fig.3 分離したT細胞をImmunoCult Human CD3/CD28/CD2 T Cell Activatorで活性化・増殖したもの

使用方法:

  1. 分離したヒト T 細胞(1 x 106 cells/mL) に適切なサイトカイン(例: 30 - 100 IU/mL IL-2; ST-02502)を加えた ImmunoCult-XF T Cell Expansion Medium で培養
  2. ヒトT 細胞のアクティベートには、ImmunoCult Human CD3/CD28 あるいは CD3/CD28/CD2 T Cell Activator を細胞溶液1 mLあたり、25 µL加え 37°C 、5% CO2 で 最長3 日間インキュベートする。

 

ImmunoCult-XF T Cell Expansion Medium(ST-10981)

ImmunoCult T Cell製品によるT細胞の活性化、増殖および分化に最適化された無血清・ゼノフリー培地です。 

使用方法:

  1. 上記活性化したヒトT細胞の増殖は、サイトカインを加えたImmunoCult-XF T Cell Expansion Mediumで、細胞密度1 x 106 cells/mLに調整して 37°C、5% CO2 で培養。
  2. 3-4日毎にサイトカインを加えたImmunoCult-XF T Cell Expansion Mediumを交換する。
  3. より長期間培養する場合は7-10日毎に増殖したT細胞を回収し、新しい培地で1 x 106 cells/mLに調整。ImmunoCult Human CD3/CD28 あるいは CD3/CD28/CD2 T Cell Activator で再活性化。

Fig.4 EasySepで分離したT cellsをImmunoCult Human CD3/CD28/CD2 T Cell Activatorで活性化して各培地で静置培養 (1ドナーあたり3回培養)
(A) rhIL-2を加えたImmunoCult-XF T Cell Expansion Medium あるいは他社の無血清培地 
(B) rhIL-2を加えたImmunoCult-XF T Cell Expansion Medium あるいは血清を加えた他社培地
T細胞はday 0 に活性化。その後7-8日毎に day 21 に培養開始の細胞濃度にたいする増幅度を解析

 

【関連製品】

商品コード

商品名

梱包単位

ST-17751

EasySep Release Human CD3 Positive Selection Kit

kit

ST-10971

ImmunoCult Human CD3/CD28 T Cell Activator

2 mL

ST-10970

ImmunoCult Human CD3/CD28/CD2 T Cell Activator

2 mL

ST-10981

ImmunoCult-XF T Cell Expansion Medium

500 mL