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ES/iPS細胞研究者必見! 基底膜Laminin 521の酵素処理をしない継代方法

[ 2012-02-23 ]

BioLamina 社ヒト組み換えラミニンLaminin-521 上で培養したES/iPS 細胞の酵素処理をしない継代方法についての日本語マニュアルができました。
*マニュアル中には従来通り酵素を使用して細胞を素早く剥がす方法と、酵素を使用しないで穏やかな条件で細胞を剥がす方法がございます。酵素処理をしないので、ES/iPS 細胞表面上の分子を傷つけずに穏やかに細胞を剥がすことができます。抗体を使用した表面マーカーでの検出に有効です。

 

Laminin-521の酵素処理をしないES/iPS 細胞の継代方法についてのプロトコルはこちらをクリック

 

BioLamina社が提供するラミニンの概要プレゼンテーション

 

 

【特長】


Laminin-521は、通常ヒトES細胞で発現分泌されるラミニンです。(その他、腎臓、神経筋接合部、肺、胎盤でも見つかっています。)

 

ヒトES/iPS 細胞はLaminin-521 をcoating した表面ではMonolayer で増殖し、均質な細胞として培養され、トリプシン消化または、EDTA処理(酵素を使用しないで)してsingle cell suspension をプレーティングする簡単な方法で継代培養可能です。

 

ROCK inhibitor 不要、defined、フィーダーフリー、動物由来成分フリーの培養システムで多能性マーカーを発現するヒトES/iPS 細胞の自己再生を長期にわたり促進します。その増殖はマトリゲル(Matrigel) 上での増殖より早く安定しています。

 

下記VideoよりES 細胞がMonolayer で増殖する様子をご覧頂けます。


 

 

【Laminin-521のプレーティング操作】

 


1.Laminin-521をプレートへコーティング


 

2.PBSでコンフルエントになった細胞を洗浄及びTrypLE/Trypsin/EDTAを添加―1-5分インキュベーション

 


3.Single cell suspensionを遠心後、新しい培地で細胞ペレットを再懸濁
 

 

 

4.Laminin-521をコートしたプレート上に最適な量の細胞及び培地を加える

 

 

 

 

 

 

【Laminin-521での培養データ】

 

FIGURE 1

 Human recombinant Laminin-521、mouse laminin-111、Matrigel上で酵素処理しバラバラにされたhES細胞をROCK inhibitorなしで培養した細胞生存についての結果です。また、培地にmTeSR1 を使用しsingle cell suspensionでプレーティングされhES細胞はROCK inhibitor (Y-27632)を添加したもの及び添加しないもので24時間培養後にクリスタルバイオレット染色されました。
Human recombinant Laminin-521上で培養したhES細胞のみROCK inhibitorなしでの生存が確認されました。

 

 

 

 

 

FIGURE 2

ROCK inhibitorなし、single-cellsでHuman ES細胞は急速にまた、数ヶ月間連続して増殖しました。Human ES細胞をclumps の状態でマトリゲル上で培養するよりも簡単で長期間効率的に培養ができます。

 

 

 

 

 

 

技術資料
Laminin-521 上で培養したES/iPS 細胞の継代方法
STEMdiff_APEL_Medium製品資料
ES/iPS cells Researchサイエンスレター

 

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