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独創的な肝臓オルガノイド培養系:改善法 vs. 従来法の比較!「HepatiCult」

[ 2018-04-10 ]

肝臓オルガノイドは、自家幹細胞移植の評価だけでなく、in vitroでの疾患モデリングのための潜在的可能性も有します。薬物スクリーニングで使用するための肝臓疾患モデリングおよび、正常細胞や疾患細胞のバイオバンクの生成をする事が、近い将来に実現可能となります。

Huch et al., (ハンス・クレバース(Hans Clevers)ラボ)は、in vitroで無限に増殖(> 1年間)を可能にする独創的な肝幹細胞由来肝臓オルガノイドへの培養系(間葉ニッチ不要の条件でdefinedな培地)を開発しました。得られた肝臓オルガノイドは、in vitroで肝細胞機能を示します。

STEMCELL Technologies社の「HepatiCult」は、Huch法(Huch et al., Nature 2013)に基づいて改良し、よりシンプルな肝臓オルガノイド培養系を提供します。

HepatiCultは下記の文献を元に開発されています。

Huch et al., Nature 2013 February 14; 494(7436): 247-250. Doi:10.1038/nature11826.

 

 

Huchプロトコールに基づいて開発

Lgr5陽性細胞は、肝臓が種々の障害をうけたときに特異的に出現します
(すなわち、正常な肝臓には存在しません)

 

 

従来法との比較:「HepatiCult」のメリット

  • 肝障害・肝管のハンドピッキングが不要
  • フローサイトメトリーでの幹細胞ソーティング不要
  • 肝細胞含有肝管のエンリッチメントに最適された酵素消化カクテル・プロトコール
  • 成分が明確な無血清培地
  • 4~5日間で肝臓オルガノイドを形成可能

 

 

シンプルに7日間でオルガノイドを形成 ワークフロー 

Matrigelに埋め込んで、HepatiCultで培養した肝管は、7日間でオルガノイドの芽を形成

肝管は最初に管末端からオルガノイドの芽を形成し、オルガノイドもまた管側から成長します。
シングルオルガノイドは、消化で得られた小さな肝臓断片から形成する可能性もあります。(Scale bar, 200 μm)

 

得られた肝臓オルガノイドは典型的な形態・増殖能を示す

特徴的な肝細胞様形態を示す肝前駆細胞由来オルガノイド

得られたオルガノイドは、肝細胞典型的な形態(タイトジャンクション、二核、多角形)を示します。
上図は20回継代した肝前駆細胞由来オルガノイド。

 

 

HepatiCultで培養した肝前駆細胞由来肝臓オルガノイドの免疫細胞化学分析

播種した肝管から出現している肝臓オルガノイドの陽性染色免疫細胞化学分析。染色マーカー:上皮膜貫通膜タンパク質(EPCAM)、タイトジャンクションタンパク質(ZO-1)、肝側底膜からグルタチオンを流出する多剤耐性タンパク質(MRP4)、前駆細胞マーカー(SOX9)、肝転写因子(HNF4)。(Scale bar, 100 μm.)

 

肝臓オルガノイドの遺伝子発現プロファイルなどのデータは、ISSCRのポスターをご参照ください

 

 

関連リンク

 

製品リスト

商品コード

商品名

梱包単位

ST-06030

HepatiCult Organoid Growth Medium (Mouse)

Kit