NaiveCult ナイーブ型ヒトES/iPS細胞への誘導・増殖培地

【NaiveCult製品】
NaiveCultは、トランスジーンフリー(transgene-free)で、プライム型ヒト多能性幹細胞(hPSCs)をナイーブ型にリセットするための誘導・増殖培地です。
(ナイーブ型:ナイーブな、ナイーブ状態。プライム型:プライムドな、プライム状態)


【NaiveCultのアドバンテージ】
 NAIVE.  ナイーブ型関連遺伝子を高発現するhPSCsを維持
 TRANSGENE-FREE.  外因性因子フリーでナイーブ状態に復帰
 ROBUST.   複数のhPSC株にわたって一貫した機能
 DEFINED.   予めスクリーニングした高品質なコンポーネントが含まれる


 ● NaiveCult Induction Kit (ST-05580) は、トランスジーンフリーの化学的誘導で、プライム型ヒト胚性幹細胞(ES)および誘導多能性幹細胞(iPS)をナイーブ型にリセットする培地です。このキットは、イギリスケンブリッジ大学のCambridge Stem Cell Instituteからのライセンスを受けて開発されました(Guo et al. (2017))。mTeSR1 (ST-85850) 又はTeSR-E8 (ST-05990)で維持された、複数のプライム型ヒトESおよびiPS細胞株にわたって一貫した機能を保ちます。NaiveCult Induction Kit(ST-05580)でリセットしたナイーブ型ヒト多能性幹細胞(hPSCs)は、ナイーブ型に特徴的な、均一なドーム状の、屈折エッジを有する明るい位相差像のコロニーを形成します。また、ナイーブ型hPSCsに関連する遺伝子発現プロファイルを維持します。 (Takashima et al.; Guo et al. 2016; Guo et al. 2017) 。
※ 他にhistone deacetylase inhibitor (HDACi)(別売のSodium Butyrate (ST-72242)又は、Valproic Acid (Na Salt) (ST-72292))が必要になります。詳細はマニュアルをご覧ください。


 ● NaiveCult Expansion Medium (ST-05590) は、リセットしたナイーブ型ヒト胚性幹細胞(ES)および誘導多能性幹細胞(iPS)を増殖する培地です。この培地は、イギリス・ケンブリッジ大学のCambridge Stem Cell InstituteのProf. Austin Smithによって開発された「t2iL + Gö」に基づいた組成です。STEMCELL Technologies社がライセンスを受け、遺伝子発現プロファイルを維持したまま細胞増殖を促進するよう組成を最適化して発売しました。
NaiveCult Induction Kit(ST-05580)で得られたナイーブ型ヒトES/iPS細胞、トランスジーン誘導(Takashima et al.)または胚由来(Guo et al. 2016)のナイーブ型ヒト多能性幹細胞に適用可能です。
NaiveCult Expansion Mediumで培養したリセットされたナイーブ型hPSCsは、ナイーブ型に特徴的な、均一なドーム状の、屈折エッジを有する明るい位相差像のコロニーを形成します。また、ナイーブ型hPSCsに関連する遺伝子発現プロファイルを維持します。 (Takashima et al.; Guo et al. 2016; Guo et al. 2017) 。
※ NaiveCult systemは、フィーダー細胞(不活性化したマウス胚線維芽細胞(iMEFs))との共培養系です。株CF-1またはDR4 を推奨します。詳細はマニュアルをご覧ください。


【プロトコル】

Fig. 1 プライム型からナイーブ型hPSCsへの誘導スキーム 


【コンポーネント】
NaiveCult Induction Kit (ST-05580)
● NaïveCult Induction Basal Medium, 76 mL
● NaïveCult 20X Induction Supplement A, 4 mL
● NaïveCult 1000X Induction Supplement B, 80 µL
● NaïveCult Expansion Basal Medium, 2 x 400 mL
● NaïveCult 5X Induction Supplement C, 200 mL
● NaïveCult 1000X Induction Supplement D, 500 µL
● NaïveCult 1000X Expansion Supplement, 500 µL

NaiveCult Expansion Medium Kit (ST-05590)
● NaïveCult Expansion Basal Medium, 400 mL
● NaïveCult 5X Expansion Supplement, 100 mL
● NaïveCult 1000X Expansion Supplement, 500 µL

【データ例】

Fig.2 プライム型ヒトES/iPS細胞からナイーブ状態へ転換
(A) 7回継代したH9 ES細胞および (B)9回継代したWLS-1C iPS細胞を、NaiveCult Induction Kitを使用してナイーブ状態に戻し、NaiveCult Expansion Mediumで培養した。戻す間に、コロニーは平らな形態からナイーブ型に特徴的な、屈折エッジを有するドーム状の、密に詰まった形態に変化した。


Fig. 3 NaiveCult Media Systemで培養したhPSCsは、ナイーブ型関連遺伝子を高発現する。NaiveCult Induction Kit とNaiveCult Expansion Mediumで培養した(A) H9 ES細胞および (B) WLS-1C iPS細胞の遺伝子発現プロファイル。


Fig. 4 NaiveCult Expansion Mediumで培養したナイーブ型hPSCsは、再度プライム型に戻して3系統への分化が可能。
NaiveCult Expansion Mediumで培養したナイーブ型hPSCsは、mTeSR1 (ST-05850)で再プライミングされ、3つの体細胞系統すべてに分化した。
(A) STEMdiff Definitive Endoderm Kit (ST-05110)を用いて、分化されたヒトWLS-1C iPS細胞のフローサイトメーターの分画。>90% CXCR4+/SOX17+胚体内胚葉前駆細胞を示す。
(B) STEMdiff Mesodermal Induction Medium (ST-05220) を用いて、分化されたヒトWLS-1C iPS細胞のフローサイトメーターの分画。>80% Brachyury+/OCT4-中胚葉前駆細胞を示す。
(C) STEMdiff SMADi Neural Induction Kit (ST-08581) を用いて、分化されたヒトWLS-1C iPS細胞神経前駆細胞の免疫染色イメージ(PAX6 (緑) and SOX1 (赤))。

【関連製品】
● ROCK inhibitor (Y-27632) (ST-72304) -ナイーブ型にリセットしたhPSCsの継代後の生存を増加させる。
● 0.1% Gelatin in Water (ST-07903)– iMEFフィーダー細胞を播種するゼラチンコートプレートの作成
● DMEM/F-12 with 15 mM HEPES (ST-36254)- iMEF 培地の準備 (DMEM/F-12 + 10% FBS)
● Accutase (ST-07920)- ナイーブ型にリセットしたhPSCsのシングルセル継代
● Cryostor® CS10 (ST-07931)- ナイーブ型にリセットしたhPSCsの凍結保存


プライム型hPSCを維持する培地:
● mTeSR1 (ST-05850)- アルブミン含有、プライム型hPSCを維持する培地
● TeSR-E8 (ST-05940)- ゼノフリー、プライム型hPSCを維持する培地

 【文献】
● Takashima Y et al. (2014) Cell 158(6): 1254–69.
● Guo G et al. (2016) Stem Cell Reports 6(4): 437–46.
● Guo G et al. (2017) Development 144(15): 2748–63." 920



本製品は、「研究用」です。研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。

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フライヤー

NaiveCult製品資料(英語)

英語マニュアル

NaiveCult製品マニュアル

製品情報

製品コード 製品名 梱包単位 保存温度 該当法規 MSDS マニュアル・関連資料
日本語 英語 その他
ST-05580 NaiveCult Induction Kit 1Kit 冷蔵/冷凍  
ST-05590 NaiveCult Expansion Medium 500mL 冷蔵/冷凍  
ST-72242 Sodium Butyrate 500mg 室温  
ST-72292 Valproic Acid (Na Salt) 500mg 冷凍(-20℃)  

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