ヒト間葉系幹細胞用培地(MesenCult)

【間葉系幹細胞について】


骨髄間質は当初、骨髄の造血成分の構造骨格として機能すると考えられていました。それ以来、間質は異種細胞集団で構成されており、物理シグナルと化学シグナルの組み合わせによって骨髄中の造血幹細胞(HSC)の増殖・分化に対して正負両方の調節作用を有することが広く証明されています。また間質には間葉系幹細胞(MSC)と呼ばれる別の非造血細胞も含まれており、これらは自己複製することも、骨、軟骨、筋肉、腱、脂肪へ分化することも可能です。MSCがHSCと非常に似ている点は、数が極めて少なく、骨髄細胞100,000個中1個という推定頻度でしか存在しないことです。MSCはまた、“Mesengenesis”と呼ばれる造血に類似した段階的成熟過程を経て種々の成熟細胞型を生じます。これらの細胞が骨形成原(骨)細胞を産生する能力を見るためのアッセイが開発されています。造血細胞と同じように、骨髄中に存在する間葉系前駆細胞の細胞表面表現型には不明な点が多く残っています。しかし、これらの細胞はコロニー形成線維芽細胞(CFU-F)アッセイを用いてin vitroで定量することが可能です。線維芽細胞コロニーに由来する培養細胞は何代にもわたってさらに増殖することが可能であり、その後も種々の成熟細胞型に分化する能力は保持されます。より原始的な間葉系前駆細胞も存在すると考えられますが、多くの研究者達はこれらの培養細胞をその特徴から間葉系「幹細胞」と呼ぶようになりました。その表面表現型はCD45とCD34が陰性、CD105(SH2)、CD73(SH4)、CD90(Thy-1)が陽性と定義されています。


【MesenCult製品の概要】







【 MSCの増殖用培地 】

MesenCult-ACF Plus Medium Kit (ST-05445)  New 
MesenCult-ACF Plus Culture Kit (ST-05448)  New 
ヒト間葉系幹細胞(MSC)の単離、培養、およびコロニーアッセイ(CFU-F)に最適な、血清フリーかつ、動物由来成分を含まない(animal component-free, ACF)培地です。ヒト骨髄由来MSCsの多分化能や形態を保持したまま、in vitroで長期培養することができます。増殖効率が血清含有培地より優れているだけでなく、血清や血小板溶解物といったヒト・動物由来成分を一切使用しないため、より再現性と信頼性の高いMSC培養が可能になります。継代・保存用のACF製品を併用すれば、MSCsの単離から保存まで完全に動物由来成分フリーの条件下で行うことが可能です。

【特長】
CONSISTENCY. 動物由来成分フリー(ACF)の組成で再現性が向上
HIGH-PERFORMANCE. 血清含有培地より優れた増殖効率
FUNCTIONAL. 継代培養の初期から後期まで、MSCsの3系統分化能を維持
OPTIMIZED. ヒト組織から直接のMSC培養に最適化

【キット内容】
・500 mL MesenCult-ACF Plus Medium
・1 mL MesenCult-ACF Plus 500X Supplement
・1 mL Animal Component-Free Attachment Substrate (ST-05448のみ)
  注1)上記はいずれも単品販売しておりません。
  注2)MesenCult-ACF Plusの完全培地には、L-Glutamine (ST-07100)の添加が必要です(詳細は製品マニュアル参照)。

【データ例】

MesenCult-ACF Plusでのヒト骨髄由来MSC増殖は、他社培地(ゼノフリーおよび血清フリー)より速い。MesenCult-ACF Plus(n=4)、Commercial Medium 1(n=3)、Commercial Medium 2(n=2)の増殖比較データ。


MesenCult-ACF Plusで増殖したヒト骨髄由来MSCは、多分化能を保持している。
(A)増殖したヒト骨髄由来MSC、(B)分化した脂肪細胞(Oil Red O染色)、(C)分化した軟骨細胞(Alcian Blue染色)、(D)骨芽細胞(Alizarin Red S染色)。

【関連製品】
完全に動物由来成分フリーな条件でMSCsを継代、保存することができます。
ACF Cell Dissociation Kit (ST-05426) --- 動物由来成分フリーの継代用試薬。MesenCult-ACF Plusで培養するMSCsの接着を最適化するよう調製されています。
Mesencult-ACF Freezing medium (ST-05490) --- 動物由来成分フリーの凍結保存用培地。



MesenCult-ACF Culture kit (ST-05449)
おしらせ: 
ST-05440, ST-05449は販売中止となりました。代替品はST-05445, ST-05448です。
 (2018年5月) 詳しくはこちら>>
ヒト骨髄・脂肪由来の間葉系幹細胞の単離、コロニーアッセイ(CFU-F)および長期増殖に最適な動物由来成分不含(animal component-free)のキットです。
 ・ キット内容: 400 mL MesenCult-ACF Basal Medium + 100 mL MesenCult-ACF 5X Supplement (ST-05440)
           1 mL MesenCult-ACF Attachment Substrate (単品販売なし)
 ・ ご注意: MesenCult-ACF Dissociation Kit (ST-05426) とともにご使用ください。MesenCult-ACFで継代培養される細胞の接着を最適化します。また、MesenCult-ACFにはL-Glutamine (ST-07100) を添加してご利用ください。
 ・ データ: MesenCult-ACFによるヒトMSC培養結果をご参照ください。
 
 図: MesenCult-ACFで培養したヒト骨髄由来MSCの増殖 (n = 3; Mean ± SEM)


MesenCult-XF Culture Medium (ST-05420)
おしらせ: 
ST-05420, ST-05429は販売中止となりました。
 (2018年5月) 詳しくはこちら>>
【特長】
 ゼノフリー、ロット差最小限
 プライマリー組織からMSCの増殖
 長期培養に最適(> 8 passages)
 血清ベースの培地より速い増殖

図1: MesenCult-XFで培養したヒト骨髄由来MSCの増殖 (n = 3; Mean ± SEM)
図2: MesenCult-XFで培養したMSCは、血清ベース培地より、高い軟骨細胞形成の分化能を示す。


図3:MesenCult-XFで培養したヒト骨髄由来MSCの多分化能を示す。



MesenCult-SF culture kit (ST-05429)
おしらせ: ST-05420, ST-05429は販売中止となりました。 (2018年3月) 詳しくはこちら>>
ヒト間葉系幹細胞のために標準化された無血清培地です。厳密に品質管理された製品なのでMSC培養系を標準化し、実験間の再現性を向上させます。MSCの増殖およびCFU-Fアッセイによる定量に最適です。長期培養と分化能の維持もサポートします。
 ・ キット内容: MesenCult-XF Medium (ST-05420)
           MesenCult-SF Attachment Substrate (ST-05424)
 ・ ご注意: 必ずMesenCult-ACF Dissociation Kit (ST-05426) とともにご使用ください。MesenCult-XFで継代培養される細胞の接着を最適化できます。また、MesenCult-XFにはL-Glutamine (ST-07100) を添加してご利用ください。
 ・ データ: 本ページ下の「技術資料」をご参照ください。


MesenCult-hPL Medium (ST-05439)
ヒト間葉系幹細胞の増殖やCFU-Fアッセイに最適化された、ヒト血小板ライセートを含む無血清培地です。血清を含む培地に比べて組成が明らかで性能が優れており、MesenCult-SFやACFに比べてお求め易い価格です。
※ヒト血小板ライセートの単品販売もございます。製品ページはこちら>>


MesenCult Proliferation Kit (Human) (ST-05411)
ヒト間葉系幹細胞の増殖やCFU-Fアッセイに最適化された、血清含有培地のキットです。
 ・ キット内容: MesenCult Basal Medium (Human) 450 mL (ST-05401)
           MesenCult Stem Cell Stimulatory Supplements (Human) 50 mL (ST-05402)


【 MSCからの分化用培地 】

MesenCult-ACF Chondrogenic differentiation Medium (ST-05455)
ヒト間葉系幹細胞から軟骨形成細胞に分化させるための培地です。
 ・ 内容: MesenCult-ACF Chondrogenic Differentiation Basal Medium (95 mL)
       MesenCult-ACF 20X Chondrogenic Differentiation Supplement (5 mL)
       (いずれも、単品販売なし)
 ・ 詳細はフライヤーご覧ください>>


MesenCult Osteogenic Stimulatory Kit (Human) (ST-05404)
おしらせ: ST-05404, ST-05434は販売中止となりました。後継品は、ST-05465 MesenCult Osteogenic Differentiation Kit (Human)です。 (2017年12月)
ヒト間葉系幹細胞から骨形成前駆細胞に分化させるためのキットです。またCFU-Oアッセイで骨芽細胞数を定量できます(ラット骨髄細胞からのCFU-Oアッセイもサポートします)。


MesenCult Osteogenic Differentiation Kit (Human) (ST-05465) NEW
ヒト骨髄由来、およびヒト多能性幹細胞由来の間葉系幹細胞・前駆細胞から骨形成前駆細胞に分化させるためのキットです。最短14日で分化が可能です。増殖用MesenCult培地(ST-05411, 05439, 05445)で培養した骨髄由来MSCs、およびSTEMdiff Mesenchymal Progenitor Kit(ST-05240)で誘導されたES/iPS細胞由来MPCsへのご利用に最適です。本ページ下部のデータ例もご参照ください。

 ・ キット内容: MesenCult Osteogenic Differentiation Basal Medium (Human), 200 mL (#05466)
           MesenCult Osteogenic Differentiation 5X Supplement, 50 mL (#05467)
 
Mesencult Adipogenic Differentiation Kit (Human) (ST-05412)
ヒト間葉系幹細胞から脂肪細胞を含む脂肪生成系列へと分化させるための完全培地です。血清含有培地(例:MesenCult Proliferation Kit (Human) (ST-05411))および無血清培地(例:MesenCult-ACF Plus (ST-05445))で培養された、骨髄および脂肪由来MSCに最適化されています。
 ・ キット内容: 225 mL MesenCult MSC Basal Medium (Human)
           25 mL MesenCult 10X Adipogenic Differentiation Supplement (Human) (単品販売なし)
           0.5 mL MesenCult 500X Adipogenic Differentiation Supplement (Human) (単品販売なし)


【 MSC凍結保存用培地 】

MesenCult-ACF Freezing medium (ST-05490)
ヒト間葉系幹細胞凍結保存用の動物由来成分不含(animal component-free)完全培地です。MesenCultで培養したヒトMSCの保存に推奨されます。凍結ヒトMSCは-135℃(液体窒素)以下で保存してください。
 
 図: MesenCult-ACF Freezing mediumで凍結保存したヒトMSCの回収率 (n = 6 independent experiments, P = 0.0035)


【 関連製品 】
ヒト間葉系幹細胞の比重遠心分離用試薬 RosetteSep Human Mesenchymal Stem Cell Enrichment Cocktail(ST-15128)
間葉系幹細胞用研究ツールの特集>>

参考: CFU-Fアッセイの方法
塩化アンモニウム処理またはRosetteSepによる濃縮を行った低比重のヒト骨髄細胞を用意します。これをMesenCult基本培地にMSC刺激用サプリメントを加えた培地で、組織培養処理済みの100 mm 培養皿を用いて37℃、5% CO2下にて14日間培養します。その後培地を除き、非粘着性の細胞をPBSで洗い流します。粘着性を示すCFU-Fコロニーをメタノール固定し、Wright-Giemsa染色します。
(詳細は各製品のマニュアルもご参照ください)


【文献】
MesenCult-XF Medium (ST-05420)
MesenCult-SF culture kit (ST-05429)
●Chen G et al. Cell and tissue banking 2014 DEC Monitoring the biology stability of human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells during long-term culture in serum-free medium.
●Radrizzani M et al. Journal of translational medicine 2014 Bone marrow-derived cells for cardiovascular cell therapy: an optimized GMP method based on low-density gradient improves cell purity and function.
●Chen G et al. PloS one 2014 Human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells do not undergo malignant transformation during long-term culturing in serum-free medium.
●Yu J et al. PloS one 2011 JAN Efficient feeder-free episomal reprogramming with small molecules. Journal of immunological methods 2010 DEC
●Hartmann I et al. Umbilical cord tissue-derived mesenchymal stem cells grow best under GMP-compliant culture conditions and maintain their phenotypic and functional properties.
MesenCult-ACF Culture kit (ST-05449)
● Dominici M et al. Cytotherapy 2006 JAN Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. 
MesenCult-hPL Medium (ST-05439)
● Dominici M et al. Cytotherapy 2006 JAN Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.
MesenCult Osteogenic Stimulatory Kit (Human) (ST-05404)
● Rubin MR et al. The Journal of clinical endocrinology and metabolism 2011 JAN Parathyroid hormone stimulates circulating osteogenic cells in hypoparathyroidism.
MesenCult Proliferation Kit (Human) (ST-05411)
● Hussain I et al. Cell biology international 2012 JUL New approach to isolate mesenchymal stem cell (MSC) from human umbilical cord blood. 
● Mendelson A et al. FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies forExperimental Biology 2011 OCT Chondrogenesis by chemotactic homing of synovium, bone marrow, and adipose stem cells in vitro.
● Aanei CM et al. Experimental cell research 2011 NOV Focal adhesion protein abnormalities in myelodysplastic mesenchymal stromal cells. 
● Feng Y et al. Progress in biophysics and molecular biology 2010 SEP Unique biomechanical interactions between myeloma cells and bone marrow stroma cells.
MesenCult MSC Basal Medium (Human) (ST-05401)
● Karagiannidou A et al. Cellular reprogramming 2014 FEB Mesenchymal Derivatives of Genetically Unstable Human Embryonic Stem Cells Are Maintained Unstable but Undergo Senescence in Culture As Do Bone Marrow–Derived Mesenchymal Stem Cells.
● Hussain I et al. Cell biology international 2012 JUL New approach to isolate mesenchymal stem cell (MSC) from human umbilical cord blood.
● Mendelson A et al. FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology 2011 OCT Chondrogenesis by chemotactic homing of synovium, bone marrow, and adipose stem cells in vitro.
● Aanei CM et al. Experimental cell research 2011 NOV Focal adhesion protein abnormalities in myelodysplastic mesenchymal stromal cells.



本製品は、「研究用」です。研究目的にのみ使用し、人や動物の医療用・臨床診断用・食品用としては使用しないようにご注意ください。

MesenCult Osteogenic Differentiation Kit(ST-05465)による安定した骨分化

ヒト骨髄由来MSCをMesenCult-ACF Culture Kit (ST-05449)、MesenCult Proliferation Kit (ST-05411)、およびMesenCult-hPL Medium (ST-05439)で3継代培養して増殖させ、 95%コンフルエントに達したところでMesenCult Osteogenic mediumを加えて骨分化させた。14日以内でアルカリホスファターゼ活性(赤)とvon Kossa染色による石灰化(黒)が見られた。
ネガティブコントロール:増殖培地で同日数培養したもの。

MesenCult-ACF Chondrogenic Differentiation Medium(ST-05455)による安定した軟骨分化

ヒト骨髄由来MSCをMesenCult-ACF Mediumで培養し、MesenCult-ACF Chondrogenic Differentiation Mediumで軟骨形成細胞へ分化させた。
(A) 3 x 10^5 MSCsからスタートした場合。 (B) 5 x 10^5 MSCsからスタートして14日間分化した場合。

関連製品

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ヒト間葉系幹細胞 qPCRアレイ

英語マニュアル

MesenCult-XF(ヒト)での培養 英語マニュアル(ST-0542x)

MesenCult(ヒト)での培養と分化 英語マニュアル(ST-05411, 0540x)

最新引用文献リスト

MesenCult (ヒト) 使用論文例 (2012年6月)

よくある質問

MesenCultに関するFAQ

技術資料

MSC関連製品ご紹介 (分離~培養~分化)

【無料ポスター】間葉系幹細胞の定義及び特徴

MesenCult-ACFによるヒトMSC培養結果

MesenCult-XFによる骨髄由来MSCの培養

MesenCult-XFによる脂肪由来MSCの培養

プレゼンテーション

【製品紹介ウェビナー】 MesenCult-ACF (ISSCR2014収録)

製品情報

製品コード 製品名 梱包単位 保存温度 該当法規 MSDS マニュアル・関連資料
日本語 英語 その他
ST-05401 MesenCult MSC Basal Medium (Human) 450mL 冷蔵(2-8℃)  
ST-05402 Mesenchymal Stem Cell Stimulatory Supplements (Human) 50mL 冷凍(-20℃)  
ST-05411 MesenCult Proliferation Kit (Human) 500mL 冷蔵/冷凍  
ST-05412 MesenCult Adipogenic Differentiation Kit (Human) 250mL 冷蔵/冷凍  
ST-05424 MesenCult-SF Attachment Substrate 5mg 冷蔵(2-8℃)  
ST-05426 ACF Cell Dissociation Kit 2x250mL 冷凍(-20℃)  
ST-05439 MesenCult-hPL medium 500mL 冷蔵/冷凍  
ST-05445 MesenCult ACF Plus Medium Kit 500mL 冷蔵/冷凍  
ST-05448 MesenCult ACF Plus Culture Kit 1Kit 冷蔵/冷凍  
ST-05455 MesenCult-ACF Chondrogenic differentiation Medium 100mL 冷蔵/冷凍  
ST-05465 MesenCult Osteogenic Differentiation Kit (Human) 1Kit 冷蔵/冷凍  
ST-05490 Mesencult-ACF Freezing medium 50mL 冷蔵(2-8℃)  

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